Efeitos dos domínios hinge-transmembrana e transdução de sinal de GXMR-CAR na indução da ativação de células T e NK frente ao Cryptococcus spp (2022)
- Authors:
- Autor USP: SANTOS, MATHEUS HENRIQUE DOS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- DOI: 10.11606/D.17.2022.tde-08112022-174507
- Subjects: CÉLULAS-TRONCO; CRYPTOCOCCUS; FUNGOS
- Keywords: Células NK-92; Células T; Chimeric antigen receptor; Cryptococcus spp; GXMR-CAR; Infecções fúngicas invasivas; Invasive fungal infections; NK-92 cells; Receptor antigênico quimérico; T cells
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: As infecções fúngicas invasivas (IFIs) representam um sério problema de saúde pública. Dentre as doenças negligenciadas, as IFIs apresentam taxas de mortalidade em patamares semelhantes aos ocasionados pela malária ou tuberculose. A criptococose, manifestação da infecção causada por Cryptoccocus spp., é responsável por cerca de 180.000 mortes anuais globalmente. O comprometimento do sistema imune é o maior fator de risco para o estabelecimento da infecção, e as espécies Cryptococcus gattii e Cryptococcus neoformans são as de maior relevância clínica, podendo acometer tanto indivíduos imunocomprometidos quanto imunocompetentes. Esses patógenos apresentam um diverso arsenal de fatores de virulência e mecanismos de escape/subversão da resposta imunológica do hospedeiro, seja impedindo ou sobrevivendo à fagocitose, ou comprometendo a diferenciação e atuação de subtipos de células T importantes no controle da infecção. Para contornar esse processo, a presente dissertação avaliou o redirecionamento de células T e natural killer (NK) para o reconhecimento de Cryptoccocus spp. via interação com o polissacarídeo glucuronoxilomanana (GXM) presente na cápsula desse patógeno. Para isso, o receptor antigênico quimérico (CAR) com capacidade de reconhecer GXM, denominado GXMCAR, foi expresso em células T e NK através da transdução com partículas lentivirais. O redirecionamento e efeitos funcionais desencadeado por diferentes GXMR-CAR foi avaliado frente a Cryptococcus spp., sendo considerado os receptores caracterizados pelas seguintes diferenças estruturais: porções hinge-transmembrana, com IgG4-hinge e CD28-transmembrana, GXMR-IgG4-28ζ; hinge-transmembrana contendo CD8α acoplado com domínio de transdução de sinal 4-1BB ou CD28, GXMR-8-BBζ e GXMR-8-28ζ, respectivamente. Células Jurkat foram adotadas como plataforma de expressão de GXMR-CAR e deavaliação frente a C. gattii R265, C. neoformans H99 ou isolados clínicos. Células da linhagem NK-92 foram consideradas na expressão de GXMR-CAR para avaliar o controle da infecção in vitro por Cryptococcus spp. A modificação de células Jurkat com GXMR-CAR demonstrou uma maior expressão dos construtos contendo CD8α como hinge-transmembrana. A expressão de GXMR-8-BBζ ou GXMR8-28ζ propiciou melhor taxa de expansão celular comparado com as células expressando GXMR-IgG4-28ζ. A modificação com GXMR-CAR contendo CD8α como hinge/transmembrana induziu a sinalização tônica em células Jurkat, e a molécula coestimulatória 4-1BB desencadeou os maiores níveis de produção de IL-2 em comparação com CD28. Mesmo na presença da sinalização tônica, GXMR-8-BBζ ou GXMR-8-28ζ induziram um aumento significativo nos níveis de IL-2 após a incubação com GXM solúvel ou leveduras inativadas de Cryptococcus spp, enquanto a expressão de GXMRIgG4-28ζ não induziu a ativação das células. A inibição da via de sinalização do GXMRCAR com o fármaco dasatinibe, inibidor de tirosina quinases da família Src, atenuou a sinalização tônica mediada por GXMR-8-137z e GXMR-8-28z. Além disso, as células modificadas com GXMR-CAR tiveram redução da taxa proliferativa após a incubação com as leveduras inativadas, fato atenuada com a adição de dasatinibe no cultivo celular. Em complemento, células Jurkat transduzidas com GXMR-8-BBζ ou GXMR-8-28ζ são capazes de reconhecerem diferentes sorotipos de C. gattii e C. neoformans derivados de isolados clínicos, e isso resultou na ativação celular. A expressão dos diferentes GXMRCAR na linhagem celular NK-92 demonstrou maiores taxas de expressão dos construtos contendo CD8α como hinge-transmembrana, com a frequência de células modificadas com GXMR-CAR se mantendo relativamente estável por prolongados períodos de cultivo. Aatividade fungicida das células NK-92 modificadas com GXMR-8-BBζ foi avaliada frente ao Cryptococcus spp., e o co-cultivo das células com as leveduras resultou na produção de elevados níveis de INF-γ, além disso, a expressão de GXMR-8-BBζ medeia a sinalização tônica de células NK-92. Essas células foram capazes de aumentarem a susceptibilidade de Cryptococcus spp. frente a anfotericina B, enquanto o efeito fungicida e fungistático não foi alcançado. Em conclusão, a caracterização de distintos construtos de GXMR-CAR frente ao ligante, em diferentes tipos celulares, elencou os domínios de GXMR-CAR que resultaram em melhor funcionalidade do receptor na presença de Cryptococcus spp
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 02.09.2022
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
SANTOS, Matheus Henrique dos. Efeitos dos domínios hinge-transmembrana e transdução de sinal de GXMR-CAR na indução da ativação de células T e NK frente ao Cryptococcus spp. 2022. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-08112022-174507/. Acesso em: 14 nov. 2024. -
APA
Santos, M. H. dos. (2022). Efeitos dos domínios hinge-transmembrana e transdução de sinal de GXMR-CAR na indução da ativação de células T e NK frente ao Cryptococcus spp (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-08112022-174507/ -
NLM
Santos MH dos. Efeitos dos domínios hinge-transmembrana e transdução de sinal de GXMR-CAR na indução da ativação de células T e NK frente ao Cryptococcus spp [Internet]. 2022 ;[citado 2024 nov. 14 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-08112022-174507/ -
Vancouver
Santos MH dos. Efeitos dos domínios hinge-transmembrana e transdução de sinal de GXMR-CAR na indução da ativação de células T e NK frente ao Cryptococcus spp [Internet]. 2022 ;[citado 2024 nov. 14 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-08112022-174507/ - Caracterização cinética e metabólica da linhagem celular humana HKB-11 para produção da proteína recombinante alfa-glicosidase ácida
- Modification of hinge/transmembrane and signal transduction domains improves the expression and signaling threshold of GXMR-CAR specific to Cryptococcus spp.
- Titan cells and yeast forms of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are recognized by GXMR-CAR
- Serum‐free suspension cultured human cells can produce a high‐level of recombinant human erythropoietin
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.17.2022.tde-08112022-174507 (Fonte: oaDOI API)
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