Seleção de anticorpo humano anti-FGF2 a partir do hibridoma secretor do anticorpo monoclonal 3F12E7 (2021)
- Authors:
- Autor USP: MAGALHÃES, CAROLINA GEORG - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMI
- DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-04052022-162508
- Subjects: MELANOMA ANIMAL; FIBROBLASTOS; ANTICORPOS MONOCLONAIS; HIBRIDOMAS; NEOVASCULARIZAÇÃO PATOLÓGICA; METÁSTASE ANIMAL; CAMUNDONGOS; MODELOS ANIMAIS; IMUNOGLOBULINAS; ELISA EM ANIMAL; CÉLULAS ENDOTELIAIS
- Keywords: Antibody humanization; Fragment antigen binding; Fragmento de ligação ao antígeno, Seleção guiada; Guided selection, Phage display; Humanização de anticorpos; Melanoma; Melanoma; Phage display
- Language: Português
- Abstract: O fator de crescimento de fibroblastos 2 (FGF2) é considerado uma proteína chave no desenvolvimento do melanoma, sendo responsável por desempenhar papel importante no crescimento do tumor, angiogênese e metástase. O anti-FGF2 3F12E7,um anticorpo monoclonal (mAb) murino, foi previamente obtido por colaboradores e mostrou ser uma estratégia antitumoral promissora para melanoma, quando testado em camundongos. Considerando o potencial terapêutico do mAb anti-FGF2 3F12E7, somado à limitação do uso deste anticorpo murino em humanos, neste trabalho tivemos como objetivo a humanização deste anticorpo utilizando a tecnologia de phage display para a obtenção, pela técnica de seleção guiada, de anticorpos humanos correspondentes ao mAb murino anti-FGF2 3F12E7. Para o processo de humanização foram construídas três bibliotecas de fragmento de ligação ao antígeno (Fab): murino, híbrido e humano. As técnicas de phage display, panning, phage ELISA e ELISA foram realizadas, em cada etapa da humanização, para a seleção de Fab com afinidade pelo antígeno recombinante FGF2 (rFGF2). A construção da biblioteca Fab murino foi realizada a partir do hibridoma anti-FGF2 3F12E7. O gene Fd (região variável e primeiro domínio constante da cadeia pesada VH+CH1) do clone murino com maior ligação ao rFGF2 por ELISA foi clonado em vetor contendo a biblioteca de genes de cadeia leve (LC) humanos para a construção da biblioteca Fab híbrido. Os genes LC humanos de três clones híbridos selecionados por ELISA foram clonados em vetor contendo a biblioteca de genes Fd humanos para a construção das bibliotecas Fab humano.Os clones Fab humanos selecionados com afinidade pelo rFGF2 apresentaram stop códon na sequência da LC, apesar de possuírem sequências Fd funcionais. A estratégia de seleção guiada utilizada não possibilitou a seleção de clones Fab humanos funcionais, porém resultou na seleção de LC e Fd humanas funcionais. Seguiu-se para a estratégia de clonar as regiões variáveis das LC e Fd humanas em vetores AbVec (contendo os genes da região constante da LC e HC de imunoglobulina humana) e combinar cada uma das 3 LC com as 8 HC humanas selecionadas para expressão de IgG completos por cotransfecção transitória em células HEK293-F. Dos 20 anticorpos expressos, 7 mostraram ligação ao rFGF2 por ressonância plasmônica de superfície (SPR). A atividade funcional desses 7 anticorpos foi avaliada através de ensaios in vitro de proliferação e migração celular utilizando células endoteliais humanas (HUVEC) e células de melanoma humano (SKMel-28). Os anticorpos humanos anti-FGF2 62K98H e 85L117H foram capazes de reduzir, de forma significante, o número de células viáveis e de atenuar a migração celular, nas duas linhagens celulares, em comparação ao controle negativo (IgG irrelevante), resultado próximo ao observado anteriormente com o anticorpo murino anti-FGF2 3F12E7 utilizado como modelo para a humanização
- Imprenta:
- Data da defesa: 01.12.2021
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
MAGALHÃES, Carolina Georg. Seleção de anticorpo humano anti-FGF2 a partir do hibridoma secretor do anticorpo monoclonal 3F12E7. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-04052022-162508/. Acesso em: 16 maio 2025. -
APA
Magalhães, C. G. (2021). Seleção de anticorpo humano anti-FGF2 a partir do hibridoma secretor do anticorpo monoclonal 3F12E7 (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-04052022-162508/ -
NLM
Magalhães CG. Seleção de anticorpo humano anti-FGF2 a partir do hibridoma secretor do anticorpo monoclonal 3F12E7 [Internet]. 2021 ;[citado 2025 maio 16 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-04052022-162508/ -
Vancouver
Magalhães CG. Seleção de anticorpo humano anti-FGF2 a partir do hibridoma secretor do anticorpo monoclonal 3F12E7 [Internet]. 2021 ;[citado 2025 maio 16 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-04052022-162508/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-04052022-162508 (Fonte: oaDOI API)
How to cite
A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas
