Estudo sobre a adesão de Escherichia coli uropatogênica com marcadores fenotípicos e genotípicos de E. coli enteroagregativa a células epiteliais (2021)
- Authors:
- Autor USP: SCHÜROFF, PAULO ALFONSO - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMM
- DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-20012022-161237
- Subjects: MICROBIOLOGIA; GENÉTICA BACTERIANA; ESCHERICHIA COLI; INFECÇÕES BACTERIANAS GRAM-NEGATIVAS; FENÓTIPOS; GENÓTIPOS; CÉLULAS EPITELIAIS; SISTEMA UROGENITAL; TRATO URINÁRIO; MUTAÇÃO GENÉTICA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Escherichia coli; Escherichia coli; Adesinas; Adhesins; Diarreia; Diarrhea; Infecção do trato urinário; Pathogenesis; Patogenicidade; Urinary tract infection
- Language: Português
- Abstract: Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um importante patotipo diarreiogênico, enquanto E. coli uropatogênica (UPEC) é o agente mais importante de infecção do trato urinário (ITU). Nos últimos anos, fatores de virulência de EAEC têm sido detectados em cepas de E. coli causadoras de ITU, mostrando a importância dessas cepas híbridas. Nesse sentido, um estudo prévio identificou a presença de marcadores genéticos de EAEC (aatA, aap e pet) e o padrão de adesão agregativa (AA) na cepa UPEC-46, isolada de ITU. No presente estudo, a cepa UPEC-46 foi analisada genotípica e fenotipicamente com o objetivo de identificar a(s) adesina(s) responsável(eis) pelo estabelecimento do padrão AA e seu papel na patogênese bacteriana. O fenótipo AA foi observado para a UPEC-46 nos ensaios de adesão com as inhagens de células HeLa, HT-29 e 5637, após 3 ou 6 h de interação bactéria-células; entretanto, a formação de biofilme não foi detectada sob diferentes condições de cultivo ou superfícies abióticas. Adicionalmente, foram detectadas as produções de curli, celulose, bacteriocinas, toxina Pet e de resistência à atividade bactericida do soro humano. O genoma completo dessa cepa foi sequenciado e as análises de bioinformática mostraram que essa cepa está filogeneticamente relacionada a cepas de EAEC atípicas, isoladas de fezes humanas e com perfis de virulência semelhantes. As sequências de três plasmídios foram identificadas e montadas. No plasmídio p46-1, de maior peso molecular (~135 kb), foram localizados os genes de EAEC (aatA, pet e aap) e os genes responsáveis pela biogênese do pilus denominado aggregate-forming pili (AFP). No plasmídio p46-2 (~109 kb) foram identificados os genes de resistência a antimicrobianos e no plasmídio p46-3 (~9 kb) os genes responsáveis pela síntese da colicina E1.A mutação no gene afpA, que codifica a pilina de AFP, na UPEC-46 levou à perda de produção e montagem dessa fímbria e redução significativa na adesão às células epiteliais. Para identificar outras possíveis adesinas envolvidas no padrão AA produzido pela UPEC-46, uma biblioteca de mutantes usando o transposoma EZ-Tn5 < R6Kγori/KAN-2 > foi obtida e os mutantes analisados. As inserções do transposon foram sequenciadas nos mutantes não aderentes, identificando genes relacionados à síntese de lipopolissacarídeos, metabolismo/transportadores celulares e às adesinas AFP e fímbria tipo 1. Construções genéticas a partir da cepa selvagem UPEC-46 mutagenizando os genes afpA (pilina da AFP) e fimH (pilina da fímbria tipo 1) foram analisadas em modelos in vitro (adesão e invasão) e in vivo (colonização intestinal em camundongos BALB/c e infecção ascendente do trato urinário em camundongos C57/BL6). Foi evidenciado o efeito sinérgico das adesinas AFP e fímbria tipo 1 no estabelecimento da aderência e na capacidade de invasão utilizando as linhagens celulares HeLa, HT-29 e 5637. Além disso, ambas as adesinas atuaram de forma conjunta na colonização intestinal e do trato foram localizados os genes de EAEC (aatA, pet e aap) e os genes responsáveis pela biogênese do pilus denominado aggregate-forming pili (AFP). No plasmídio p46-2 (~109 kb) foram identificados os genes de resistência a antimicrobianos e no plasmídio p46-3 (~9 kb) os genes responsáveis pela síntese da colicina E1.
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- Data da defesa: 08.07.2021
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ABNT
SCHÜROFF, Paulo Alfonso. Estudo sobre a adesão de Escherichia coli uropatogênica com marcadores fenotípicos e genotípicos de E. coli enteroagregativa a células epiteliais. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-20012022-161237/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Schüroff, P. A. (2021). Estudo sobre a adesão de Escherichia coli uropatogênica com marcadores fenotípicos e genotípicos de E. coli enteroagregativa a células epiteliais (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-20012022-161237/ -
NLM
Schüroff PA. Estudo sobre a adesão de Escherichia coli uropatogênica com marcadores fenotípicos e genotípicos de E. coli enteroagregativa a células epiteliais [Internet]. 2021 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-20012022-161237/ -
Vancouver
Schüroff PA. Estudo sobre a adesão de Escherichia coli uropatogênica com marcadores fenotípicos e genotípicos de E. coli enteroagregativa a células epiteliais [Internet]. 2021 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-20012022-161237/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-20012022-161237 (Fonte: oaDOI API)
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