Investigação do processo de reconhecimento molecular da crotoxina em macrófagos: avaliação da interação toxina-bicamada e receptores peptídeo formil (2021)
- Authors:
- Autor USP: PIMENTA, LUCIANA DE ARAUJO - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMF
- DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-08032022-161121
- Subjects: MACRÓFAGOS; TOXINAS EM ANIMAL; ADJUVANTES IMUNOLÓGICOS; METABOLISMO ENERGÉTICO; PEROXIDASE; ATIVAÇÃO ENZIMÁTICA; WESTERN BLOTTING; FAGOCITOSE
- Keywords: Crotoxin; Crotoxina; Estudo Termo-Estrutural; Formyl Peptide Receptors; Immunomodulation; Imunomodulação; Macrófagos; Macrophages; Receptores Peptídeo Formil; Thermostructural Study
- Language: Português
- Abstract: Vários estudos têm demonstrado que a Crotoxina (CTX), principal toxina do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus, possui ações antitumoral, anti-inflamatória, antiviral e imunomoduladora em modelos in vivo e in vitro. Em macrófagos, atividades biológicas, como crescimento, diferenciação, ativação, reconhecimento, endocitose, migração e secreção são processos relacionados à sinalização mediada por receptores expressos na superfície da membrana dessas células. Em relação às atividades imunomoduladoras, a CTX estimula, em particular, o metabolismo energético dos macrófagos e a produção de citocinas e Lipoxina A4 (LXA4) e seu análogo estável 15-Epi-LXA4 (15-Epi-LXA4), mediadores lipídicos com potente efeito imunomodulador. Sobre diferentes processos fisiopatológicos, estas ações da CTX são bloqueadas em sua totalidade por Boc-2, um antagonista do receptor peptídeo formil peptídeo (FPR). Além dos FPRs, essas atividades biológicas também envolvem processos como abertura e fechamento de canais iônicos, geração de curvatura de membrana e formação de poros. Apesar dessas evidências, ainda não se sabe se os FPRs estariam envolvidos e se também participam da entrada da toxina nos macrófagos, e ainda, de que forma esta toxina interage com diferentes moléculas da membrana. No presente estudo, foi investigado se o silenciamento dos FPRs 1 e 2 nos monócitos THP-1 ou macrófagos THP-1 poderia comprometer a entrada da CTX, por meio da técnica de nucleofecção para o silenciamento e imunofluorecências para observação da entrada da toxina nas células utilizando ou não inibidores como Boc-2 (FPRs 1 e 2).Foram realizados ensaios para avaliar atividade biológica como dosagem de peróxido, espraiamento, fagocitose e técnica de western blotting. Em ensaios termo-estruturais, foram utilizados lipídio neutro, como DPPC e aniônicos, como DPPG e DPPS que são mais abundantes na membrana celular dos macrófagos e técnicas como DSC, EPR e vazamento de carboxifluoresceína. Dos resultados, tanto a técnica de silenciamento de siRNA de FPR-1, bem como o ensaio farmacológico, usando Boc-2 (FPRs 1 e 2) demonstrou claramente a participação crucial de FPRs 1 e 2 e sua interação com a cascata de sinalização a jusante para tirosina quinase em ações imunomoduladoras da CTX sobre as funções de macrófagos humanos. Por outro lado, os FPRs não estão envolvidos com a entrada na toxina em macrófagos humanos, sugerindo que esses receptores são fundamentais para acionar as ações parácrinas e autócrinas de LXA4 e seu análogo 15-Epi-LXA4 induzidas por CTX em macrófagos. Foi demonstrado também que CTX pode além de penetrar nas células THP-1, induzir poros apenas nas membranas lipídicas aniônicas, em especial vesículas compostas por DPPS. Considerando que a seletividade da composição lipídica varia em diferentes tecidos e órgãos do corpo humano, os estudos termoestruturais aqui apresentados são extremamente importantes para abrir novas investigações sobre as atividades biológicas descritas para CTX em diferentes sistemas biológicos reais
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- Data da defesa: 27.08.2021
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
PIMENTA, Luciana de Araujo. Investigação do processo de reconhecimento molecular da crotoxina em macrófagos: avaliação da interação toxina-bicamada e receptores peptídeo formil. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-08032022-161121/. Acesso em: 03 out. 2024. -
APA
Pimenta, L. de A. (2021). Investigação do processo de reconhecimento molecular da crotoxina em macrófagos: avaliação da interação toxina-bicamada e receptores peptídeo formil (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-08032022-161121/ -
NLM
Pimenta L de A. Investigação do processo de reconhecimento molecular da crotoxina em macrófagos: avaliação da interação toxina-bicamada e receptores peptídeo formil [Internet]. 2021 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-08032022-161121/ -
Vancouver
Pimenta L de A. Investigação do processo de reconhecimento molecular da crotoxina em macrófagos: avaliação da interação toxina-bicamada e receptores peptídeo formil [Internet]. 2021 ;[citado 2024 out. 03 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-08032022-161121/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.42.2021.tde-08032022-161121 (Fonte: oaDOI API)
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