O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos (2022)
- Authors:
- Autor USP: BERTELI, THALITA SOUZA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGO
- DOI: 10.11606/T.17.2022.tde-12072022-162148
- Subjects: ÁCIDOS GRAXOS; BLASTOCISTO; OÓCITOS; EMBRIÃO; OVÁRIO
- Keywords: Blastocyst; Estimulação ovariana; Fatty acids; FIV; IVF; L-carnitina; L-carnitine; Lipid profile; Oocyte vitrification; Ovarian stimulation; Perfil lipídico; Vitrificação de oócitos
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: Objetivamos investigar os efeitos do tempo de equilíbrio do protocolo de vitrificação e o impacto de um meio de vitrificação suplementado com ácidos graxos (AG) e L-carnitina (LC) no desenvolvimento embrionário e perfil lipídico de oócitos murinos. Adicionalmente, analisar o impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro (FIV) e vitrificação de oócitos com meio padrão e suplementado com AG e LC no perfil lipídico de blastocistos murinos. Material e métodos: Estudo experimental incluindo 936 oócitos murinos C57BL/6J, divididos aleatoriamente em FIV fresco (CTR) e grupos de exposição à solução de equilíbrio (ES). Os oócitos foram expostos ao ES dos meios Irvine (IRV), Tvitri-4 (T4) ou T4 suplementado com LC e AG (T4-LC/FA) por 7 ou 10 minutos, vitrificadosaquecidos e submetidos à FIV. Também avaliamos o perfil lipídico de oócitos imediatamente após a exposição a solução de equilíbrio (ES) utilizando os mesmos tempos de equilíbrio. O desenvolvimento embrionário, a análise do perfil lipídico do oócito e análise da via lipídica foram comparados entre os grupos. Também comparamos o perfil lipídico de blastocistos produzidos in vivo a partir de ciclos naturais de acasalamento (N), produzidos in vivo após superovulação (S) e acasalamento, ou produzidos in vitro após superovulação e FIV. Para os experimentos in vitro, oócitos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos: oócitos frescos fertilizados in vitro e grupos vitrificados utilizando os meios de vitrificação descritos previamente. Oócitos frescos ou vitrificados/aquecidos foram inseminados e cultivados in vitro. O perfil lipídico dos oócitos e blastocistos foi avaliado por meio de perfil de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Resultados: O maior tempo de equilíbrio resultou em menores taxas de sobrevida oocitária e formação de blastocistos, redução daabundância relativa de lipídios estruturais, como fosfatidilcolinas e esfingomielinas, variando de acordo com a composição de ES. Também induziu a formação bolhas na superfície do oócito predominantemente em IRV, raramente em T4 e ausentes em T4-LC/FA. A fim de revelar as vias metabólicas associadas à fase de equilíbrio da vitrificação, a análise da via lipídica foi realizada e ambos, valores de p e valores de impacto das vias mostraram que o metabolismo do ácido linoleico (p=0.00223; impacto =1) e metabolismo do ácido alfalinoléico (p=0.00084; impact = 0.33) foram as vias mais impactadas, seguida do metabolismo dos glicerofosfolipídios (p=0.0167; impact = 0.25). A estimulação ovariana somente ou associada à FIV promoveu um enriquecimento de fosfolipídios saturados em blastocistos. A vitrificação resultou em uma abundância relativa reduzida de fosfolipídios e esfingolipídios em comparação com blastocistos gerados a partir de oócitos frescos de FIV. Conclusões: Uma fase de equilíbrio mais longa pode influenciar o desenvolvimento embrionário e induzir mudanças na composição lipídica do oócito relacionadas à integridade da membrana. Os resultados sugerem internalização dos ácidos oleico e linoléico adicionados ao ES pelo oócito e, de certa forma, parecem contribuir para a preservação dos fosfolipídios da membrana, independentemente dos tempos de equilíbrio avaliados. Várias classes de fosfolipídios foram afetadas em blastocistos pela S, FIV e/ou vitrificação de oócitos, e mesmo um curto tempo de exposição às soluções à base de lipídios durante a vitrificação do oócito foram suficientes para induzir alterações no perfil lipídico que foram sustentadas até estágio de blastocisto
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 11.04.2022
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
BERTELI, Thalita Souza. O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-12072022-162148/. Acesso em: 02 abr. 2026. -
APA
Berteli, T. S. (2022). O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-12072022-162148/ -
NLM
Berteli TS. O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos [Internet]. 2022 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-12072022-162148/ -
Vancouver
Berteli TS. O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos [Internet]. 2022 ;[citado 2026 abr. 02 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-12072022-162148/ - MACS (Magnetic Activated Cell Sorting) antes ou após a centrifugação em gradiente de densidade para o preparo seminal
- Zidovudine inhibits telomere elongation, increases the transposable element LINE-1 copy number and compromises mouse embryo development
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