Avaliação do perfil de microRNAs exossomais em portadores de hipercolesterolemia familial (2022)
- Authors:
- Autor USP: FREITAS, RENATA CAROLINE COSTA DE - FCF
- Unidade: FCF
- Sigla do Departamento: FBC
- DOI: 10.11606/T.9.2022.tde-29072022-230948
- Subjects: PROTEÍNAS; ESPECTROMETRIA DE MASSAS; HIPERCOLESTEROLEMIA; SEQUENCIAMENTO GENÉTICO
- Keywords: Espectrometria de massa; Exosomes; Exossomos; Familial hypercholesterolemia; Hipercolesterolemia Familial; Mass spectrometry; miRNAs; miRNAs; Next-generation sequencing; Proteínas; Proteins; Sequenciamento de nova geração
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A Hipercolesterolemia Familial (HF) é uma doença hereditária do metabolismo lipídico que causa aos portadores alta incidência de aterosclerose prematura. A HF pode ser diagnosticada clínica e geneticamente, entretanto, apenas cerca de 40% podem ter confirmados pelo diagnostico molecular. Assim, outros sistemas de diagnóstico devem ser avaliados. Ultimamente devido a estabilidade em fluidos biológicos, os exossomos circulantes apresentam grande potencial, pois carreiam um número variado de compostos e são considerados veículos de intercomunicação entre os tecidos. Sabe-se que vários RNAs são carreados nos exossomos, incluindo miRNAs, lncRNA e uma variedade de proteínas. Estes componentes podem ser marcadores de diagnóstico para várias doenças inclusive a HF e suas complicações cardiovasculares. Foram utilizadas amostras de exossomos plasmáticos provenientes de 54 pacientes HF sem uso de estatina por, no mínimo, seis semanas, e 38 indivíduos normolipidêmicos para sequenciamento de miRNAs e estudo da proteômica. Os exossomos foram isolados utilizando dois métodos precipitação química e cromatográfica de exclusão de tamanho e caraterizados utilizando: dispersão de luz dinâmica, Western blotting, rastreamento de nanopartículas (NanoSight), imunomarcação e microscopia eletrônica de transmissão. Os miRNAs e proteínas foram extraídos dos exossomos e analisados por sequenciamento de nova geração e espectrometria de massa, respectivamente. Os dados clínicos, biodemográficos e laboratoriais dos pacientes HF e controles indicaram diferenças significativas esperadas entre os grupos, indicando que foram selecionados adequadamente. A caracterização físico-química dos exossomos mostrou resultados com tamanho de ˜90nm e imunorreação positiva para tetraspaninas. O resultado do sequenciamento identificou acima 2000 miRNAs. Os miR-122- 5p e miR-21-5p apresentaramexpressão aumentada no grupo HF (log2FC=1,79 e log2FC=1,27, respectivamente), e o miR-122-5p pós normalização em relação ao controle manteve significativo comparados ao controle (p=0,034). A análise comparativa entre exossomos e plasma total mostrou diferença significativa, pois foram identificadas 239 proteínas (p <0,05) diferentes entre exossomos e plasma. Em exossomos, 17 proteínas foram aumentadas e 21 diminuídas em pacientes com HF em comparação com o controle (p <0,05). Destas, seis proteínas foram mais abundantes em HF e sete proteínas foram menos abundantes em exossomos de pacientes com HF em comparação com o controle. A análise de enriquecimento por bioinformática mostrou que a maior parte dessas moléculas (miRNAs e proteínas) foram relacionadas com metabolismo lipídico, dislipidemia, aterosclerose, doença arterial coronariana, adipogênese. Assim, na busca de novos alvos como potenciais biomarcadores de diagnóstico da HF, nossos resultados da análise integrativa entre os miRNAs e as proteínas exossomais abre novas frentes de pesquisa mais bem direcionadas, para a validação desses miRNAs e proteínas exossomais
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- Data da defesa: 26.05.2022
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
FREITAS, Renata Caroline Costa de. Avaliação do perfil de microRNAs exossomais em portadores de hipercolesterolemia familial. 2022. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2022. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29072022-230948/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Freitas, R. C. C. de. (2022). Avaliação do perfil de microRNAs exossomais em portadores de hipercolesterolemia familial (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29072022-230948/ -
NLM
Freitas RCC de. Avaliação do perfil de microRNAs exossomais em portadores de hipercolesterolemia familial [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29072022-230948/ -
Vancouver
Freitas RCC de. Avaliação do perfil de microRNAs exossomais em portadores de hipercolesterolemia familial [Internet]. 2022 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-29072022-230948/ - Circulating extracellular vesicles as biomarkers and drug delivery vehicles in cardiovascular diseases
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Informações sobre o DOI: 10.11606/T.9.2022.tde-29072022-230948 (Fonte: oaDOI API)
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