Caracterização funcional da interação entre a E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e as proteínas UXT-V1 e UXT-V2 (2022)
- Authors:
- Autor USP: SPAGNOL, VALENTINE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBQ
- DOI: 10.11606/D.17.2022.tde-21062022-143841
- Subjects: BIOQUÍMICA; PROTEÍNAS; GENOMAS; TRANSCRIÇÃO GÊNICA
- Keywords: E3 ubiquitin ligases; E3 ubiquitina ligases; Fbxo7; Ubiquitinação; Ubiquitination; UXT
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Fbxo7 é uma das 69 proteínas do tipo F-box em humanos que interage com SKP1, Culina1 e RBX1 para formar o complexo enzimático E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7), que promove a ubiquitinação de seus substratos. A proteína Fbxo7 é superexpressa em uma variedade de linhagens celulares tumorais humanas, mas não nesses tecidos normais, e é descrita como um regulador negativo da via de sinalização de NF-κB por mediar a ubiquitinação de cIAP-1 e TRAF2. Em um estudo de identificação de substratos em larga escala, foi identificada a proteína UXT (Ubiquitously Expressed Transcript) como um potencial substrato de SCF(Fbxo7). Esta proteína pertence à família das prefoldinas (PFD) e é amplamente expressa em diversos tecidos humanos. Duas isoformas de UXT, UXT-V1 e UXT-V2, foram descritas com funções distintas, sendo a UXT-V2 um cofator transcricional que ativa a transcrição de NF-κB no núcleo e a UXT-V1 modulando a apoptose induzida por TNF no citoplasma. Combinamos as técnicas de co-imunoprecipitação, ubiquitinação in vitro e em células, análise de restrição de cadeia de ubiquitina, ensaio de estabilidade com cicloheximida, fracionamento celular e microscopia confocal para investigar a interação entre Fbxo7 e ambas as isoformas de UXT. Validamos a UXT-V1 e a UXT-V2 como substratos da E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e mostramos que SCF(Fbxo7) realiza uma modificação pós-traducional para regulação de funçãona UXT-V1 e para degradação do substrato via proteassoma na UXT-V2. Demostramos que a superexpressão de UXT-V2, mas não de UXT-V1, recruta Fbxo7 do citosol para o núcleo das células para mediar a interação entre elas e observamos que as isoformas diferem em suas localizações subcelulares. Também mostramos que o knockdown de FBXO7 ou a superexpressão do mutante Fbxo7-ΔF-box protege a UXT-V2 da degradação proteassomal mediada por Fbxo7, aumentando a resposta dos repórteres da via do NF-κB. Neste trabalho, demonstramos que SCF(Fbxo7) promove a degradação proteassomal da UXT-V2, tendo por consequência funcional a inibição da via de sinalização do NF-κB e caracterizando um novo ponto de regulação da via. Por fim, resultados preliminares demonstraram que a UXT-V2 promove um aumento na ubiquitinação do Estrogen Receptor (ER) e, ao contrário, promove uma redução na ubiquitinação do Androgen Receptor (AR). A caracterização da interação entre Fbxo7/UXT com os receptores AR e ER será avaliada em ensaios posteriores
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2022
- Data da defesa: 22.03.2022
- Status:
- Artigo publicado em periódico de acesso aberto (Gold Open Access)
- Versão do Documento:
- Versão publicada (Published version)
- Acessar versão aberta:
-
ABNT
SPAGNOL, Valentine. Caracterização funcional da interação entre a E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e as proteínas UXT-V1 e UXT-V2. 2022. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2022. Disponível em: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-21062022-143841/. Acesso em: 07 maio 2026. -
APA
Spagnol, V. (2022). Caracterização funcional da interação entre a E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e as proteínas UXT-V1 e UXT-V2 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-21062022-143841/ -
NLM
Spagnol V. Caracterização funcional da interação entre a E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e as proteínas UXT-V1 e UXT-V2 [Internet]. 2022 ;[citado 2026 maio 07 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-21062022-143841/ -
Vancouver
Spagnol V. Caracterização funcional da interação entre a E3 ubiquitina ligase SCF(Fbxo7) e as proteínas UXT-V1 e UXT-V2 [Internet]. 2022 ;[citado 2026 maio 07 ] Available from: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-21062022-143841/
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