Tese

Validação do modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos (2021)

• Authors:
  • Leite, Marcel Nani
  • Frade, Marco Andrey Cipriani (Orientador)
• Autor USP: LEITE, MARCEL NANI - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RCM
• DOI: 10.11606/T.17.2021.tde-11042022-111955
• Subjects: BIOMEDICINA; ESTUDOS DE VALIDAÇÃO; INSUMOS FARMACÊUTICOS; PELE; FARMACOCINÉTICA
• Keywords: Cell viability; Estudos de validação; hOSEC model; In vitro technique; Inoculação de neoplasia; Insumos farmacêuticos; Método in vitro; Modelo hOSEC; Neoplasm seeding; Pharmaceutical raw material; Validation study; Viabilidade celular
• Agências de fomento:
  • Financiamento CNPq
  • Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
  • Financiamento CAPES
• Language: Português
• Abstract: Métodos alternativos ao uso de animais vêm sendo estudados e desenvolvidos ao longo dos anos, merecendo destaque a cultura de explante de pele organotípica humana (hOSEC). Considerada o modelo que mais se aproxima da pele humana em condições in vitro, apresenta estrutura 3D e todas as células da pele nativa, sendo um modelo versátil para o estudo de várias doenças e testes de novos fármacos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi validar o modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos. Foram utilizados os fármacos Dacarbazina e Rifampicina. A viabilidade celular para ambos os fármacos foi testada pelo ensaio MTT em queratinócitos e fibroblastos primários e em linhagens imortalizadas da pele (HaCaT e 3T3). Também foi testada a sensibilidade de linhagens de melanoma humano A375, 1205 Lu e SK-MEL-103 tratadas com Dacarbazina nos tempos de 24, 48 e 72 horas. A viabilidade tecidual do modelo hOSEC tratado com os fármacos foi avaliada pelo método TTC nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas. A Dacarbazina e o modelo hOSEC foram validados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência e, seguida à validação, a absorção do fármaco pelo tecido nos tempos de 30 minutos, 1, 3, 6, 12 e 24 horas foi analisada também por cromatografia. A estrutura da pele e apoptose pós-tratamento com Dacarbazina foram analisados por histologia corada com hematoxilina e eosina e TUNEL, respectivamente. Foi realizada a inoculação da linhagem A375 no modelo hOSEC e avaliada o local de aplicação e características das células por meio da coloração hematoxilina e eosina. Os testes de viabilidade frente à Dacarbazina mostraram que tanto nas células primárias quanto nas imortalizadas da pele foram consideradas viáveis (acima de 77%). Em relação as linhagens neoplásicas, a A375 foi a que se mostrou mais sensívelem todas as concentrações, principalmente no tempo de 72 horas, diferentemente da 1205 Lu e SK-MEL-103, que se mostraram mais resistentes. Já utilizando a Rifampicina, foi observado uma sensibilidade maior quando exposta à concentração de 200 µg/mL nas quatro diferentes células estudadas. A validação do método foi linear, preciso e exato, demonstrando uma alta confiança para sua utilização. Em relação a absorção da Dacarbazina pela pele, foi observado que a concentração do fármaco na pele foi aumentando e consequentemente diminuindo no meio de cultura até 24 horas, atingindo concentração máxima pela pele de 36,36 µg/mL (18,18%) da dose inicial de 200 µg/mL no tempo de 12 horas. Dados histológicos mostraram que as camadas da pele foram mantidas estruturalmente em todos os tempos estudados. Não foram observadas células apoptóticas nas camadas epidérmica e dérmica. A inoculação das células A375 foi realizada de maneira adequada, intradermicamente, e as características de células neoplásicas foram mantidas. Portanto, nossos resultados confirmam que o modelo hOSEC pode ser um modelo alternativo para avaliar a dinâmica de absorção e distribuição de insumos farmacêuticos na pele, assim como também pode ser possível obter um modelo ex vivo de tumor na pele a partir da inoculação de células neoplásicas
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2021
• Data da defesa: 17.12.2021

Informações sobre o DOI: 10.11606/T.17.2021.tde-11042022-111955 (Fonte: oaDOI API)
• Este periódico é de acesso aberto
• Este artigo é de acesso aberto
• URL de acesso aberto
• Cor do Acesso Aberto: gold
• Licença: cc-by-nc-sa

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How to cite

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• ABNT

  LEITE, Marcel Nani. Validação do modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17138/tde-11042022-111955/. Acesso em: 28 dez. 2025.

• APA

  Leite, M. N. (2021). Validação do modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17138/tde-11042022-111955/

• NLM

  Leite MN. Validação do modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos [Internet]. 2021 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17138/tde-11042022-111955/

• Vancouver

  Leite MN. Validação do modelo ex vivo de pele humana (hOSEC) para ensaio de absorção de insumos farmacêuticos [Internet]. 2021 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17138/tde-11042022-111955/

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