Expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae da translocase de membrana mitocondrial externa Tom20 de Aspergillus fumigatus (2021)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, DHÁRA CAVALCANTI DE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- DOI: 10.11606/D.60.2021.tde-24032022-091721
- Subjects: ASPERGILLUS; MITOCÔNDRIAS; SACCHAROMYCES; FUNGOS
- Keywords: Aspergillus fumigatus; Expressão heteróloga; Heterologous expression; Mitochondria; Mitocôndria; Saccharomyces cerevisiae; Tom20
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O Aspergillus fumigatus é um fungo encontrado em todas as regiões no mundo. Nos últimos anos, o A. fumigatus deixou de ser apenas um fungo saprofítico de menor importância, para se tornar um dos principais agentes patogênicos oportunistas em pacientes imunossuprimidos. A atividade mitocondrial está diretamente relacionada com o processo de germinação dos conídios deste fungo. As mitocôndrias apresentam duas membranas: a membrana mitocondrial externa e a interna. A maioria das proteínas mitocondriais são codificadas pelo DNA nuclear, sendo endereçadas para as mitocôndrias após a sua síntese no citosol. Os complexos mitocondriais TOM (translocases de membrana mitocondrial externa) e TIM (translocases de membrana mitocondrial interna) são responsáveis por reconhecer e endereçar estas proteínas para os diferentes compartimentos mitocondriais. Um dos componentes do complexo TOM é a subunidade Tom20, cuja função ainda não foi descrita em A. fumigatus. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a função do gene tom20 de A. fumigatus através da expressão heteróloga deste em Saccharomyces cerevisiae tom20+/-. Para isso, o gene Aftom20 foi clonado em vetor pYES2/CT pela técnica CPEC. Posteriormente, a levedura S. cerevisiae tom20+/- foi transformada com a construção pYES2/Aftom20. A seguir, foi realizada a indução da expressão do gene Aftom20 nesta levedura, sendo tal expressão confirmada por PCR quantitativo em tempo real. A presença da proteína recombinante nas mitocôndrias da levedura transformada com a construção pYES2/Aftom20 foi confirmadapor Western Blotting. A sequência deduzida de aminoácidos desta proteína foi analisada apresentando 211 aminoácidos. Ao comparar a taxa de crescimento da levedura que expressava a proteína recombinante, com a daquela que não a expressava, foi constatado que não há diferença entre os crescimentos destas leveduras em meio fermentável. A medida do potencial de membrana mitocondrial de esferoplastos recombinantes de S. cerevisiae tom20+/-, evidenciou que nestes, o NADH induziu a formação de um potencial de membrana mitocondrial maior do que nos esferoplastos que não expressavam a proteína recombinante. Além disso, estes últimos não foram capazes de realizar a fosforilação de ADP. Assim, estes resultados sugerem que a proteína recombinante Tom20 de A. fumigatus possui função importante para a atividade mitocondrial, por realizar o reconhecimento de proteínas que compõem a cadeia transportadora de elétrons e a ATP-sintase, possibilitando seu transporte para as mitocôndrias
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2021
- Data da defesa: 29.11.2021
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
-
ABNT
OLIVEIRA, Dhára Cavalcanti de. Expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae da translocase de membrana mitocondrial externa Tom20 de Aspergillus fumigatus. 2021. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-24032022-091721/. Acesso em: 04 ago. 2025. -
APA
Oliveira, D. C. de. (2021). Expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae da translocase de membrana mitocondrial externa Tom20 de Aspergillus fumigatus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-24032022-091721/ -
NLM
Oliveira DC de. Expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae da translocase de membrana mitocondrial externa Tom20 de Aspergillus fumigatus [Internet]. 2021 ;[citado 2025 ago. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-24032022-091721/ -
Vancouver
Oliveira DC de. Expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae da translocase de membrana mitocondrial externa Tom20 de Aspergillus fumigatus [Internet]. 2021 ;[citado 2025 ago. 04 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-24032022-091721/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.60.2021.tde-24032022-091721 (Fonte: oaDOI API)
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