Caracterização do papel de Nop53 na montagem da subunidade ribossomal maior em Saccharomyces cerevisiae (2021)
- Authors:
- Autor USP: BAGATELLI, FELIPE FRANCO DE MELO - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- DOI: 10.11606/T.46.2021.tde-17012022-145054
- Subjects: RIBOSSOMOS; SACCHAROMYCES
- Keywords: Biogênese ribossomal; Exossomo; Nop53; Nop53; Pre-60S; Pré-60S; Ribosome biogenesis; RNA exosome
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Os ribossomos são complexos ribonucleoproteicos conservados formados por duas subunidades assimétricas (40S e 60S em eucariotos) responsáveis pela tradução da informação genética e catálise da síntese proteica. A montagem destes complexos em eucariotos é mais bem descrita em S. cerevisiae, constituindo um processo celular energeticamente dispendioso e com múltiplas etapas. Ela tem origem no nucléolo com a transcrição do pré-rRNA 35S e requer o recrutamento hierárquico e transiente de cerca de 200 fatores de montagem para garantir a formação correta dos centros funcionais aptos à tradução. Neste processo, que se estende no núcleo e citoplasma, 79 proteínas ribossomais associam-se gradativamente à medida que o prérRNA é dobrado, modificado e processado. O processamento do pré-rRNA 35S consiste na remoção progressiva de espaçadores internos (ITS1 e ITS2) e externos (5ETS e 3ETS), que separam e flanqueiam os rRNAs maduros componentes de ambas subunidades ribossomais. A clivagem do ITS1 separa as vias de maturação do pré-60S e do pré-40S. O ITS2, que, em associação a fatores de montagem, forma uma estrutura denominada ITS2-foot, é o último espaçador do pré-60S a ser removido. A composição do ITS2-foot permanece inalterada no nucléolo até a transição entre o estado E nucleolar e a formação da partícula Nog2 nuclear. Nesta etapa, a liberação do fator Erb1 permite o recrutamento do fator de montagem conservado e essencial Nop53. Na base do ITS2-foot, Nop53 recruta o exossomo via RNA helicase Mtr4 para a clivagem 3-5 exonucleolítica de parte do ITS2 levando à desmontagem do ITS2-foot. O fato de Nop53 atuar como ponte entre dois grandes complexos e apresentar uma estrutura flexível e estendida nos levou a aprofundar a caracterização de seu papel durante a maturação do pré60S. Neste trabalho, usando análise proteômica quantitativa label-freebaseada em espectrometria de massas, caracterizou-se o interactoma de Nop53, e avaliou-se o impacto da depleção de Nop53 no interactoma da subunidade catalítica do exossomo Rrp6 e na composição de pré-ribossomos representativos de quase todas as etapas de maturação do pré-60S. Em paralelo, foram caracterizados mutantes truncados de Nop53 e avaliada por pull-down a interação de Nop53 com componentes do exossomo. Os resultados obtidos mostraram que Nop53 é capaz de interagir com o cofator do exossomo Mpp6, sugerindo pontos adicionais de interação durante o recrutamento do exossomo ao pré-60S. A análise do interactoma de Rrp6 mostrou uma associação precoce do exossomo aos intermediários pré-ribossomais nucleolares mais iniciais, anteriores aos previamente descritos. Mudanças na composição dos intermediários pré-60S revelaram que a depleção de Nop53 afeta a transição entre o estado E e a partícula Nog2, afetando eventos tardios de maturação como o recrutamento de Yvh1. Comparando-se o efeito da depleção de Nop53 com o de mutantes nop53 desprovidos da região de recrutamento do exossomo, obtivemos evidências bioquímicas do papel estrutural de Nop53 na base do ITS2- foot. Em conjunto, estas observações, à luz de estruturas de intermediários pré-ribossomais recentemente descritas, nos permitiram concluir que o recrutamento de Nop53 ao pré-60S contribui para a estabilização de eventos de remodelamento do rRNA que antecedem a formação da partícula Nog2
- Imprenta:
- Data da defesa: 19.11.2021
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
BAGATELLI, Felipe Franco de Melo. Caracterização do papel de Nop53 na montagem da subunidade ribossomal maior em Saccharomyces cerevisiae. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-17012022-145054/. Acesso em: 10 nov. 2024. -
APA
Bagatelli, F. F. de M. (2021). Caracterização do papel de Nop53 na montagem da subunidade ribossomal maior em Saccharomyces cerevisiae (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-17012022-145054/ -
NLM
Bagatelli FF de M. Caracterização do papel de Nop53 na montagem da subunidade ribossomal maior em Saccharomyces cerevisiae [Internet]. 2021 ;[citado 2024 nov. 10 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-17012022-145054/ -
Vancouver
Bagatelli FF de M. Caracterização do papel de Nop53 na montagem da subunidade ribossomal maior em Saccharomyces cerevisiae [Internet]. 2021 ;[citado 2024 nov. 10 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-17012022-145054/ - Ribosome maturation factor Nop53 controls asociation of the RNA exosome with pre-60S particles
- The role of the ribosome assembly factor Nop53 in the exosome recruitment and in the formation of pre-60S maturation intermediates
- The ribosome assembly factor Nop53 has a structural role in the formation of nuclear pre-60S intermediates, affecting late maturation events
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.46.2021.tde-17012022-145054 (Fonte: oaDOI API)
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