Estudo e caracterização da enzima acetil xilano esterase de Thermobifida fusca para degradação de biomassa (2019)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, ADRIANA SANCHES DA - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: BIOMASSA; ATIVAÇÃO ENZIMÁTICA; POLISSACARÍDEOS; PAREDE CELULAR VEGETAL; POLÍMEROS (QUÍMICA ORGÂNICA); ENZIMAS HIDROLÍTICAS; AMINOÁCIDOS
- Keywords: Thermobifida fusca; Acetil xilano esterase; Acetylated xylan deacetylation; Acetylxylan esterase; Biomass; Biomassa; Cinética enzimática; Enzymatic kinetics; Thermobifida fusca; Xilano desacetilado
- Language: Português
- Abstract: A hemicelulose é o segundo polissacarídeo mais abundante na parede celular vegetal, apresentando uma estrutura principal de polímero com ramificações de açúcares como galactose, arabinose e outros monômeros como acetato, ácido ferúlico, entre outros. A hidrólise enzimática de hemicelulose permite obter açúcares de 5 ou 6 carbonos que podem ser fermentados para obtenção de produtos de interesse biotecnológico, além de expor a celulose à ação enzimática. Este trabalho caracterizou uma enzima codificada por um gene identificado na análise do genoma da bactéria termofílica Thermobifida fusca YX (GenBank ID: CP000088) como Esterase/Lipase, (GenBank: AAZ54193.1) que contém 957 pb e codifica uma proteína de 318 aminoácidos e 32,9 kDa, potencialmente uma acetil xilano esterase, que cliva o enlace éster do xilano acetilado, liberando ácido acético e facilitando a ação de outras enzimas envolvidas na degradação dos polissacarídeos vegetais. A enzima apresenta os aminoácidos S155, D256 e H286 do sítio catalítico das acetil xilano esterase, a fenda oxiânion e um pentapeptídeo altamente conservados, sendo clonada, expressa, purificada e caracterizada funcionalmente. A atividade da proteína purificada por cromatografia de afinidade foi determinada com o substrato p-nitrofenil butirato demonstrando estabilidade térmica nas temperaturas de 30ºC e 40ºC por 72 horas, ativa no pH entre 4 e 9 a 30ºC.Os parâmetros cinético enzimáticos foram determinados para os substratos 0nitrofenil acetato (km = 2,67mM; kcat = 1,59 s-1 e kcat/km = 0,59 s-1.mM-1), p-nitrofenil butirato (km = 1,07mM; kcat = 0,97 s-1 e kcat/km = 0,9 s-1.mM-1), p-nitrofenil octanoato (km = 1,44mM; kcat = 0,4 s-1 e kcat/km = 0,28 s-1.mM-1) e 1-naftil acetato (km = 12,39mM; kcat = 0,358 s-1 e kcat/km = 0,029 s-1.mM-1). A desacetilação dos substratos xilano acetilado, triacetina e alpha- D Glicose pentaacetato comprovou que a enzima é uma acetil xilano esterase (EC 3.1.1.72), sendo denominada TfAXE, pertencente as famílias 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 12 na classe das carboidrato esterases, no banco de dados CAZy e cuja propriedades apontam suas potenciais aplicações biotecnológicas
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.10.2019
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ABNT
SILVA, Adriana Sanches da. Estudo e caracterização da enzima acetil xilano esterase de Thermobifida fusca para degradação de biomassa. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13012021-163404/. Acesso em: 31 dez. 2025. -
APA
Silva, A. S. da. (2019). Estudo e caracterização da enzima acetil xilano esterase de Thermobifida fusca para degradação de biomassa (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13012021-163404/ -
NLM
Silva AS da. Estudo e caracterização da enzima acetil xilano esterase de Thermobifida fusca para degradação de biomassa [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13012021-163404/ -
Vancouver
Silva AS da. Estudo e caracterização da enzima acetil xilano esterase de Thermobifida fusca para degradação de biomassa [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 31 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13012021-163404/
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