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Tese

Golgi Reassembly and Stacking Protein: biophysical properties and their functional implications (2021)

  • Authors:
  • Autor USP: FONTANA, NATÁLIA APARECIDA - FFCLRP
  • Unidade: FFCLRP
  • Sigla do Departamento: 591
  • Subjects: ESPECTROSCOPIA; PROTEÍNAS; COMPLEXO DE GOLGI; SACCHAROMYCES
  • Keywords: Amyloid fibrils; Espectroscopia; Fibras amiloides; GRASP; Intrinsically disordered proteins; Proteínas intrinsecamente desordenadas; Secreção não convencional de proteínas; Spectroscopy; Unconventional protein secretion
  • Agências de fomento:
  • Language: Inglês
  • Abstract: GRASPs (de Golgi ReAssembly and Stacking Proteins) são proteínas inicialmente envolvidas na organização e manutenção do complexo de Golgi. Enquanto este papel vem sendo questionado nos últimos anos, muitas outras funções vem sendo a elas atribuídas. Em especial, destacamos a participação no ancoramento de vesículas de secreção que precisam atravessar o Golgi e processos de secreção não convencional. Estruturalmente, GRASPs podem ser divididas em um domínio N-terminal chamado GRASP e um domínio C-terminal que é altamente desordenado e não conservado, chamado SPR. Informação estrutural sobre GRASPs, até agora, tem sido muito escassa, o que motivou o início deste trabalho. Para estudar GRASPs, usamos a única GRASP da levedura Saccharomyces cereviseae (Grh1), um organismo modelo. Demonstramos que Grh1 possui regiões de desordem intrínseca também no domínio GRASP, sendo considerada uma proteína do tipo molten globule. Além disso, Grh1 é capaz de formar fibras do tipo amiloide quando em condições específicas in vitro, como baixo pH e temperatura levemente elevada. No objetivo de investigar uma possível correlação entre a formação de fibras e a função desempenhada por Grh1 em processos de secreção não convencional, parte desse trabalho foi realizada in vivo, e foi possível mostrar que a GRASP de levedura fibrila em condições específicas de privação de nutrientes e choque térmico. Aqui, discutimos o uso da microscopia do tempo de vida de fluorescência como uma técnica válida para auxiliar na detecção de formação de fibras in cell, e também as possíveis implicações da formação de fibras por GRASPs para formação de Compartimentos para Secreção Não Convencional (do inglês CUPS). Esse trabalho também contém experimentos iniciais que apontam para uma separação de fase líquido-líquido sofrida poe Grh1, o que estaria em consonânciacom os achados de desordem intrínseca e a recente proposta de que o Golgi seria, na verdade, uma organela em fase separada do citosol. No final deste trabalho, apresentamos ainda experimentos iniciais de caracterização de Bug1, a golgina parceira de Grh1. Não existem dados estruturais disponíveis para nenhuma golgina em solução, e sua purificação sempre se mostrou um obstáculo. Descrevemos aqui um protocolo através do qual foi possível se purificar Bug1 em grandes quantidades, abrindo caminho assim para que muitas outras descobertas sejam feitas no que diz respeito à secreção de proteínas e separação de fase líquido-líquido
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 09.06.2021
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      FONTANA, Natália Aparecida. Golgi Reassembly and Stacking Protein: biophysical properties and their functional implications. 2021. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2021. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-09082021-183946/. Acesso em: 23 abr. 2024.

    • APA

      Fontana, N. A. (2021). Golgi Reassembly and Stacking Protein: biophysical properties and their functional implications (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-09082021-183946/

    • NLM

      Fontana NA. Golgi Reassembly and Stacking Protein: biophysical properties and their functional implications [Internet]. 2021 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-09082021-183946/

    • Vancouver

      Fontana NA. Golgi Reassembly and Stacking Protein: biophysical properties and their functional implications [Internet]. 2021 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-09082021-183946/

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