Imunobiológicos para o diagnóstico laboratorial de ranavirose: clonagem e expressão do gene MCP de isolado brasileiro de Ranavirus e produção de anticorpos policlonais anti-proteína MCP recombinante (2019)
- Authors:
- Autor USP: CORRÊA, THAÍS CAMILO - FZEA
- Unidade: FZEA
- Sigla do Departamento: ZMV
- Subjects: VIROLOGIA VETERINÁRIA; ELISA EM ANIMAL; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; IRIDOVIRIDAE
- Keywords: Immunoreagents; Imunorreagentes
- Language: Português
- Abstract: Membros do gênero Ranavirus, pertencente à família Iridoviridae, têm sido responsáveis por epizootias em animais ectotérmicos em várias partes do mundo, pois representam patógenos emergentes capazes de infectar três classes de vertebrados: peixes ósseos, anfíbios e répteis. No Brasil, os relatos de surtos por ranavirose sassociados ao Frogvirus3 (FV3) ocorrem desde meados dos anos 2000, sendo cada vez mais frequentes principalmente em criações comerciais de rã-touro. Portanto, as infecções por ranavírus representam um risco para outros setores da aquicultura, como a piscicultura. Neste contexto, visando a produção de imunorreagentes para uso em testes de diagnóstico, os objetivos foram: produzir a proteína recombinante do gene MCP (Major capsid protein) do isolado brasileiro de Ranavirus, FV3-símile; produzir anticorpos policlonais de coelho anti-rMCP e, por fim, padronizar um teste de ELISA-IB (Indirect-Blocking Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Para isso, foi construído o plasmídeo pET28a/MCP, transformado em Rosetta (™) (DE3) para a expressão da proteína rMCP. Após a purificação, a produção de anticorpos policlonais anti-rMCPfoi conduzida em dois coelhos jovens através de três inoculações da proteína rMCP, por via intramuscular e subcutânea, em intervalos de 14 dias, sendo os soros analisados por Immunoblot. Para a padronização do teste ELISA-IB, foram amostrados soros de rãs-touro e realizada a infecção experimental de tilápias do Nilo, para a obtenção de soroscontroles. Destaque para os resultados com o sucesso da expressão da proteína rMCP de 50kDa,no entanto, em sua forma insolúvel sob purificação desnaturante seguida de diálise. A rMCP desencadeou a produção de anticorpos policlonais nos coelhos, já na segunda imunização. No ELISA-IB, a proteína rMCP foi utilizada como antígeno viral, seguida dos soros testes e anticorpos de bloqueio (policlonal anti-rMCP). Contudo, problemas com a obtenção de soros controles adequados dificultaram a padronização do teste, sendo possível, no entanto, identificar porcentagem de inibição em soro de rã. O uso dos imunorreagentes produzidos e o ELISA-IB demostraram potencial promissor para o diagnóstico laboratorial de infecção por ranavírus em peixes, bem como anfíbios, no intuito de colaborar para a melhoria das condições sanitárias da aquicultura brasileira. Além disso, os imunorreagentes obtidos podem propiciar novos estudos para a produção de imunógenos vacinais contra o Ranavirus
- Imprenta:
- Publisher place: Pirassununga
- Date published: 2019
- Data da defesa: 28.11.2019
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ABNT
CORRÊA, Thaís Camilo. Imunobiológicos para o diagnóstico laboratorial de ranavirose: clonagem e expressão do gene MCP de isolado brasileiro de Ranavirus e produção de anticorpos policlonais anti-proteína MCP recombinante. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74131/tde-12042021-123249/. Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Corrêa, T. C. (2019). Imunobiológicos para o diagnóstico laboratorial de ranavirose: clonagem e expressão do gene MCP de isolado brasileiro de Ranavirus e produção de anticorpos policlonais anti-proteína MCP recombinante (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Pirassununga. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74131/tde-12042021-123249/ -
NLM
Corrêa TC. Imunobiológicos para o diagnóstico laboratorial de ranavirose: clonagem e expressão do gene MCP de isolado brasileiro de Ranavirus e produção de anticorpos policlonais anti-proteína MCP recombinante [Internet]. 2019 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74131/tde-12042021-123249/ -
Vancouver
Corrêa TC. Imunobiológicos para o diagnóstico laboratorial de ranavirose: clonagem e expressão do gene MCP de isolado brasileiro de Ranavirus e produção de anticorpos policlonais anti-proteína MCP recombinante [Internet]. 2019 ;[citado 2024 abr. 25 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74131/tde-12042021-123249/
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