Papel de proteínas VgrG parálogas no sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum (2020)
- Authors:
- Autor USP: LEAL, FERNANDA CARVALHO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: PROTEÍNAS; BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS; COMPETIÇÃO; AGENTES ANTIMICROBIANOS; GENÉTICA
- Keywords: Bacterial competition; Bacterial secretion systems; Chromobacterium violaceum; Competição bacteriana; Effector proteins; Proteínas efetoras; Proteínas VgrGs parálogas; Sistema de secreção do tipo VI; Sistemas de secreção bacterianos; Type VI secretion system; VgrG paralogs
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O sistema de secreção do tipo VI (T6SS) injeta efetores tóxicos dentro das células alvo expelindo um aparato de punção composto por proteínas Hcp, VgrG e PAAR. Ainda não se sabe exatamente como as proteínas efetoras se ligam à VgrG ou o motivo da existência de várias cópias de VgrG em algumas bactérias. Recentemente, nosso grupo mostrou que a bactéria Gram-negativa Chromobacterium violaceum possui um T6SS funcional com atividade antibacteriana. O objetivo do presente trabalho é investigar os genes vgrGs do T6SS de C. violaceum. As análises in silico revelaram que C. violaceum possui seis genes vgrGs (vgrG1 a vgrG6), com os genes vgrG1 e vgrG2 localizados no cluster principal do T6SS e os demais quatro genes vgrGs localizados em clusters órfãos. As seis proteínas VgrGs apresentaram alta identidade de sequência (de 70% a 93%) e a mesma organização de domínios, com todas possuindo um potencial domínio adaptador no C-terminal. Linhagens mutantes foram obtidas com deleção individual de cada gene vgrG ou deleção sequencial até obter uma linhagem mutante sêxtupla (ΔvgrG1-6). Cada gene vgrG foi introduzido no mutante sêxtuplo. Os ensaios de competição contra bactérias como Pseudomonas aeruginosa utilizando todas estas linhagens mutantes revelaram que a VgrG3 é a mais importante para a atividade antibacteriana do T6SS, pois apenas o mutante individual ΔvgrG3 teve forte redução na capacidade de matar a P. aeruginosa; a partir do mutante triplo ΔvgrG1-3 houve perda total da competição mediada pelo T6SS; e apenas vgrG3 resgatou a capacidade de competição do mutante sêxtuplo. Ensaios de Western blot foram utilizados para avaliar a secreção de Hcp nos mutantes vgrGs de C. violaceum comoum indicativo do funcionamento do T6SS. Os dados indicaram que, dos seis mutantes individuais, apenas ΔvgrG1 e ΔvgrG3 tiveram uma diminuição da secreção de Hcp. A partir da deleção tripla ΔvgrG1-3 não houve mais secreção de Hcp. A ausência de secreção no mutante sêxtuplo foi totalmente revertida na presença de vgrG3 e fracamente recuperada com os outros genes vgrGs, indicando maior relevância de VgrG3. Ensaios de β-galactosidase revelaram baixa atividade promotora de vgrG2 e vgrG6 e uma expressão dependente da fase de crescimento nos promotores de vgrG3 e vgrG4. O vgrG3 foi o gene mais expresso em qualquer condição. Portanto, os dados obtidos neste trabalho indicam pouca redundância entre as seis VgrGs de C. violaceum, uma vez que a VgrG3 possui papel preponderante em relação às outras cinco VgrGs na montagem de um T6SS funcional com atividade antibacteriana
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2020
- Data da defesa: 19.10.2020
-
ABNT
LEAL, Fernanda Carvalho. Papel de proteínas VgrG parálogas no sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum. 2020. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2020. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04012021-111327/. Acesso em: 17 out. 2024. -
APA
Leal, F. C. (2020). Papel de proteínas VgrG parálogas no sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04012021-111327/ -
NLM
Leal FC. Papel de proteínas VgrG parálogas no sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum [Internet]. 2020 ;[citado 2024 out. 17 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04012021-111327/ -
Vancouver
Leal FC. Papel de proteínas VgrG parálogas no sistema de secreção do tipo VI de Chromobacterium violaceum [Internet]. 2020 ;[citado 2024 out. 17 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04012021-111327/
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