Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) (2020)
- Authors:
- Autor USP: BASTOS, VERIDIANA KARMANN - FSP
- Unidade: FSP
- DOI: 10.11606/T.6.2020.tde-16012021-200255
- Subjects: TOXOPLASMA GONDII; REÚSO DA ÁGUA; ÁGUA
- Keywords: Amostra Ambiental; qPCR
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Resumo - O reuso de água contribui nos âmbitos ambientais, sociais e econômicos. Entretanto a presença de parasitos em amostras hídricas tem sido evidenciada por diferentes estudos, entre eles Toxoplasma gondii. A ausência de uma metodologia padronizada para detecção de oocistos em amostras hídricas, dificulta a caracterização das mesmas, comprometendo a elaboração de uma legislação. Tendo em vista a importância do reuso da água na mitigação da escassez, do stress hídrico e diante dos desafios expostos é que o presente trabalho se insere. Objetivos - Propor técnica de concentração e recuperação de oocistos em água de reuso; propor método de extração de DNA; detectar e quantificar oocistos por qPCR. Método - Utilizando o método 1693/2014 USEPA, foram concentrados 30 L de água de reuso de 20 amostras provenientes de duas ETE's da cidade de São Paulo, Brasil. Os 15 mL resultantes desse processo foram concentrados em membrana 0,45'mü'm. O material filtrado na membrana foi recuperado por raspagem com alça bacteriológica de 10 'mü'L. Para extração de DNA foram empregadas duas técnicas: o kit comercial DNeasy PowerSoil Kit® otimizado com a enzima Zymolyase® e choque térmico. A quantificação de DNA foi realizada com a sequência alvo B1. Resultados - Na extração por choque-térmico não foi detectado DNA nas vintes amostras realizadas. Das 16 amostras submetidas à extração enzimática, quatro foram consideradas positivas. Discussão - A extração de DNA consistiu na etapa essencial para detecção e quantificação de oocisto, dado a natureza resistente das paredes.Conclusão - O reuso de água pode ser comprometido na ausência de um protocolo padronizado de detecção e quantificação de oocisto de T. gondii, que possibilite a determinação de parâmetros parasitológicos para elaboração de uma legislação.
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.11.2020
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
BASTOS, Veridiana Karmann. Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). 2020. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2020. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6143/tde-16012021-200255/. Acesso em: 28 mar. 2024. -
APA
Bastos, V. K. (2020). Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6143/tde-16012021-200255/ -
NLM
Bastos VK. Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) [Internet]. 2020 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6143/tde-16012021-200255/ -
Vancouver
Bastos VK. Toxoplasma gondii em amostras de água de reuso: proposta de método de detecção e quantificação por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) [Internet]. 2020 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6143/tde-16012021-200255/
Informações sobre o DOI: 10.11606/T.6.2020.tde-16012021-200255 (Fonte: oaDOI API)
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