Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator (2020)
- Authors:
- Autor USP: SIMÃO, VINICIUS AUGUSTO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: CÉLULAS ESTROMAIS; TECIDO ADIPOSO; BIOPROCESSOS; GENÉTICA; MUTAÇÃO GENÉTICA; PROLIFERAÇÃO CELULAR
- Keywords: Bioprocess; Bioprocesso; Bioreactor; Biorreator; Células estromais mesenquimais; Frasco spinner; Genotoxicidade; Genotoxicity; Human adipose tissue; Mesenchymal stromal cells; Spinner flask; Tecido adiposo humano
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O emprego das CEM (células estromais mesenquimais multipotentes) tem sido considerado uma alternativa terapêutica potencialmente promissora em diversos estudos pré-clínicos e clínicos. O grande interesse das CEM para a terapia celular deve-se a uma série de características, tais como, facilidade de obtenção a partir de diversos tecidos e baixa imunogenicidade, podendo ser empregadas em transplantes alogênicos. Diversos órgãos e tecidos são apontados como fontes potenciais das CTM, destacando-se mais recentemente o tecido adiposo. Em função destes aspectos, busca-se com este projeto a proposição de uma metodologia para proliferação de CEM de tecido adiposo humano em biorreator tipo tanque agitado, visando estabelecer um sistema de proliferação robusto que concilie a eficiência no rendimento celular com um menor prejuízo à qualidade genética do cultivo. Para isso foram conduzidos experimentos em cultura estática, e suspensão de menor escala (frasco spinner) e larga escala (biorreator). Os resultados demonstraram a ausência de influência do volume de meio de cultura sobre o rendimento do cultivo celular em cultura estática. No desenvolvimento de um protocolo de cultivo em frasco spinner os resultados definiram a concentração celular inicial de 30:1 (2,4 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 50% do meio a cada 72 h, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e velocidade de agitação de 50 rpm na faseproliferativa. A seguir foi otimizado o cultivo em larga escala em biorreator, que após um delineamento gradual de cada variável do bioprocesso ficou definido como sendo com: concentração celular inicial de 15:1 (1,2 x 104 células/mL), regime de adesão celular intermitente a 70 rpm, 10% de SFB no meio de cultura com renovação de 25% do meio a cada 48 h, velocidade de agitação de 50 rpm na fase proliferativa, pH 7,3, temperatura a 36,5° C, microcarregador Cultispher-S em 1 g/L e concentração de oxigênio dissolvido crescente de 20 a 40% (72 h para intervalo de ajuste). Os cultivos em biorreator também foram avaliados quanto a sua integridade genômica através do ensaio cometa que demonstrou senescência progressiva das células em cultivo e do teste do micronúcleo que foi similar a situação controle do início do cultivo. O trabalho demonstra que avaliações da integridade genômica do cultivo de CEM devem se tornar corriqueiras, para assim atestar confiabilidade à utilização das células proliferadas em larga escala para terapia celular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2020
- Data da defesa: 22.05.2020
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ABNT
SIMÃO, Vinícius Augusto. Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator. 2020. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2020. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-23082020-135727/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Simão, V. A. (2020). Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-23082020-135727/ -
NLM
Simão VA. Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator [Internet]. 2020 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-23082020-135727/ -
Vancouver
Simão VA. Estabelecimento de um bioprocesso para proliferação de células estromais mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano em biorreator [Internet]. 2020 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-23082020-135727/ - Proliferação de células-tronco derivadas de tecido adiposo humano: influência do volume de meio de cultura sobre a cinética de crescimento e parâmetros de identidade celular (2017)
- Metabolic and proliferation evaluation of human adipose-derived mesenchymal stromal cells (ASC) in different culture medium volumes: standardization of static culture
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