Papel do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina na modulação da autofagia cardíaca de camundongos (2019)
- Authors:
- Autor USP: SCHAVINSKI, ALINE ZANATTA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RFI
- Subjects: METABOLISMO DE PROTEÍNA; CORAÇÃO; PEPTÍDEOS; GENES; CALCITONINA
- Keywords: Autofagia; Autophagy; CGRP; Heart; Protein metabolism
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O Peptídeo Relacionado ao Gene da Calcitonina (CGRP) é um potente peptídeo vasodilatador amplamente distribuído no sistema nervoso central e em vários tecidos periféricos, incluindo o músculo esquelético e cardíaco. Estudos recentes do nosso laboratório demonstraram que este neuropeptídeo exerce efeitos antiproteolíticos no músculo esquelético e na manutenção da junção neuromuscular em ratos. No entanto, seu papel modulatório no controle do metabolismo de proteínas no coração ainda é completamente desconhecido. O objetivo principal deste estudo foi avaliar os efeitos agudos in vivo do CGRP na autofagia cardíaca. Para isso, camundongos C57Bl6 machos receberam uma única injeção de CGRP (100 ?g/Kg, via subcutânea) ou solução salina 0,9% e foram sacrificados após 15, 30 ou 60 minutos. Nestes períodos, foram analisados metabólitos, hormônios, marcadores da autofagia cardíaca e o estado de fosforilação de proteínas relacionadas ao controle da síntese e degradação de proteínas. Os efeitos do CGRP no fluxo autofágico foram estimados por meio do tratamento com colchicina (0,4 mg/Kg, via intraperitoneal) em camundongos alimentados ou submetidos a 24h de jejum (CEUA, 018/2010, FMRP-USP). O sangue foi coletado e os corações foram removidos para posterior análises bioquímicas, de imunoreatividade, imunofluorescência e de expressão gênica. As catecolaminas foram quantificadas por HPLC. Os resultados foram expressos como média±EPM e para análise estatística foi aplicado o teste ANOVA comnível de significância de 5%. Em camundongos alimentados, o CGRP aumentou a glicemia (~55%) e diminuiu a insulinemia (~79%) sem alterar o conteúdo de glicogênio hepático por até 60 minutos. Além disso, o tratamento com CGRP aumentou a concentração plasmáticas de ácidos graxos livres (~33%) e diminuiu a concentração de glicerol (~50%) e noradrenalina plasmática (~83%). No coração, o tratamento com CGRP aumentou o estado de fosforilação de CREB (Ser133;~3x) e da lipase hormonal sensível (~50%), sugerindo ativação da via de sinalização do AMPc/PKA. O efeito de fosforilação de CREB induzido pelo CGRP coincidiu com uma expressão elevada de SIK1 (~2x), um gene alvo de CREB bem conhecido. Após 15 min, o CGRP aumentou p62 e tendeu a diminuir a razão LC3II:LC3I sugerindo inibição da autofagia. Este efeito foi confirmado em camundongos jejuados, onde o CGRP reduziu o fluxo autofágico cardíaco, conforme estimado pela redução do conteúdo de LC3II (~50%). Em animais alimentados, o tratamento com CGRP também reduziu o estado de fosforilação de Akt, em ambos os resíduos (Thr308 e Ser473; ~60%), não alterou a fosforilação de FoxO1 (Ser256), mas aumentou o estado de fosforilação de mTOR (Ser2448) (~2x), S6 (Ser235/236) (~4x) e Ulk1 (Ser757) (~2x). Além disso, verificou-se aumento transitório da fosforilação de AMPK (Thr172) (~30%) e de Ulk1 (Ser317) (~80%). Em experimentos com cardiomiócitos de ratos neonatos, o CGRP aumentou a fosforilação de CREB e de Akt, após 15 minutos de incubação. Afosforilação de mTOR em resposta ao CGRP in vitro apresentou uma tendência de aumento. Este conjunto de resultados mostra que o tratamento agudo com CGRP induz efeitos diabetogênicos sistêmicos associados a uma rápida inibição do sistema autofágico/liossomal em coração de camundongos. Este efeito antiproteolítico é provavelmente mediado pela via do AMPc/PKA que leva à ativação da mTOR e à fosforilação inibitória em Ulk1, independentemente da sinalização da insulina/Akt
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 01.10.2019
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ABNT
SCHAVINSKI, Aline Zanatta. Papel do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina na modulação da autofagia cardíaca de camundongos. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17134/tde-17122019-121536/. Acesso em: 05 nov. 2024. -
APA
Schavinski, A. Z. (2019). Papel do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina na modulação da autofagia cardíaca de camundongos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17134/tde-17122019-121536/ -
NLM
Schavinski AZ. Papel do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina na modulação da autofagia cardíaca de camundongos [Internet]. 2019 ;[citado 2024 nov. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17134/tde-17122019-121536/ -
Vancouver
Schavinski AZ. Papel do peptídeo relacionado ao gene da calcitonina na modulação da autofagia cardíaca de camundongos [Internet]. 2019 ;[citado 2024 nov. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17134/tde-17122019-121536/
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