Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos (2019)
- Authors:
- Autor USP: PEDEZZI, RAFAEL - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: ANTIFÚNGICOS; FUNGOS; DOENÇAS INFECCIOSAS; BIOTECNOLOGIA
- Keywords: Antifungal resistance; Expressão recombinante; Fungal peptidases; Peptidases fúngicas; Purpureocillium lilacinum; Recombinant expression; Resistência a antifúngicos; Transcriptoma; Transcriptome
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O fungo ascomiceto Purpureocillium lilacinum pode ser encontrado em solo, vegetação em decomposição, insetos, nematoides e outros locais. Apresenta grande importância agrícola, visto que pode ser utilizado como controle biológico por ser capaz de infectar e matar nematoides pragas de culturas, graças às suas enzimas, como peptidases e quitinases. Além disso, o fungo apresenta importância médica, pois é capaz de gerar infecção em humanos. A terapêutica das doenças infecciosas causadas por P. lilacinum é dificultada pelo fato de ele apresentar resistência a antifúngicos "azólicos", principais moléculas aplicadas na clínica médica atualmente. O presente trabalho teve como objetivo explorar molecularmente o fungo P. lilacinum com relação à sua capacidade de resistir a antifúngicos e à sua capacidade de produzir peptidases robustas, com potencial de aplicação biotecnológica. Ferramentas moleculares como transcriptômica e proteômica foram aplicadas para acessar os dados moleculares do fungo e viabilizar análises de expressão diferencial para verificar as respostas aos antifúngicos fluconazol e itraconazol e anotação gênica para prospecção de peptidases. Foi observado que P. lilacinum promove um aumento de expressão dos genes alvo dos antifúngicos e dos genes que codificam bombas de efluxo. Com esse mecanismo, não há acúmulo de antifúngico intracelular e há compensação numérica da enzima que está sendo inibida pelo antifúngico com mais expressão da mesma. Dessa forma, o fungoconsegue manter a síntese de ergosterol normalizada. As enzimas prospectadas e expressas de maneira recombinante em Pichia pastoris foram uma serino peptidase (rPl_SerPep) e uma metalo peptidase (rPl_MetPep). A rPl_SerPep se mostrou alcalina, com temperatura ótima aparente de 60 °C e termoestável. Já a rPl_MetPep se mostrou ativa em pH neutro e com temperatura ótima aparente de 40 °C. Essas enzimas se mostraram promissoras para futuros testes de aplicação biotecnológica
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 09.08.2019
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ABNT
PEDEZZI, Rafael. Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-19122019-084515/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Pedezzi, R. (2019). Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-19122019-084515/ -
NLM
Pedezzi R. Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-19122019-084515/ -
Vancouver
Pedezzi R. Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-19122019-084515/ - Expressão comparativa da proteína recombinante alfa-glicosidade ácida humana em levedura Pichia pastoris e em células humanas HEK-293F
- Transcriptomic studies on Purpureocillium lilacinum reveal molecular mechanisms of response to fluconazole and itraconazole
- Biochemical and biophysical properties of a recombinant serine peptidase from Purpureocillium lilacinum
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