Avaliação do padrão de secreção e morfologia de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco da membrana amniótica canina (2019)
- Authors:
- Autor USP: KARAM, RAFAEL GARCIA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VCI
- Subjects: CÃES; CÉLULAS-TRONCO; SECREÇÃO
- Keywords: Exosome; Mesenchymal; Microvesicles
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O estudo das vesículas extracelulares (VEs) secretadas pelas células-tronco mesenquimais (CTM) em cultura pode ajudar a entender de maneira mais concisa o seu funcionamento. Este trabalho tem como objetivo comparar a quantidade e tamanho das vesículas extracelulares pequenas (até 150nm) derivadas de célulastronco da membrana amniótica canina. Foram isoladas células da membrana amniótica de cadelas, cultivadas e caracterizadas. Para responder ao nosso objetivo, o número de células foi normalizado em cada passagem. As CTM isoladas apresentaram uma curva de crescimento crescente até atingir a segunda passagem, seguindo-se uma diminuição até a quinta passagem. As células foram diferenciadas em tecido adipogênico, condrogênico e osteogênico. Análises por citometria de fluxo mostraram que as CTM foram positivas para marcadores mesenquimais CD90 (62,6%) e CD105 (89,5%) e negativas para marcadores hematopoiéticos CD34 (5,2%) e CD45 (3,1%). Para a análise de VEs, as células em diferentes passagens (P0-P2) foram cultivadas até atingir 80% de confluência, em seguida, o meio foi substituído por meio livre de VEs (previamente ultracentrifugado). Após 48h, o meio de cultura foi removido e centrifugado para isolar as VEs, seguido por análise de nanosight para medir a concentração e o tamanho das VEs. A caracterização por western blot também foi realizada. As VEs foram positivas para Alix e negativos para Citocromo C. Os resultados demonstraram que a concentração nessas diferentes passagensanalisadas foi aumentada em P0 comparado a P1 e P2 (P0=1,2x109±71220315, P1=3,8x108±54173333, e P2=3,3x108±170128967). No entanto, não foram encontradas diferenças no tamanho das VEs (P0 = 132nm, P1 = 130nm e P2 = 120nm). Estes resultados demonstram que a passagem inicial é enriquecida de VEs quando comparada com as passagens posteriores, indicando um efeito de deficiência in vitro no padrão de secreção das VEs.
- Imprenta:
- Data da defesa: 08.11.2019
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ABNT
KARAM, Rafael Garcia. Avaliação do padrão de secreção e morfologia de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco da membrana amniótica canina. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-28012020-105305/. Acesso em: 29 dez. 2025. -
APA
Karam, R. G. (2019). Avaliação do padrão de secreção e morfologia de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco da membrana amniótica canina (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-28012020-105305/ -
NLM
Karam RG. Avaliação do padrão de secreção e morfologia de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco da membrana amniótica canina [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-28012020-105305/ -
Vancouver
Karam RG. Avaliação do padrão de secreção e morfologia de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco da membrana amniótica canina [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 29 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-28012020-105305/
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