Regulação pré- e pós-transcricional do gene Scratch2 durante a neurogênese no tubo neural posterior (2019)
- Authors:
- Autor USP: GOES, CAROLINA PURCELL - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMC
- Subjects: NEURÔNIOS; REGULAÇÃO GÊNICA; DIFERENCIAÇÃO CELULAR; TRANSCRIÇÃO GÊNICA; CICLO CELULAR; EMBRIÃO DE GALINHA
- Keywords: Cis-elements; Elementos-cis; Gene regulation; miRNA; miRNA; Neurogênese; Neurogenesis; Regulação gênica; Scratch; Scratch
- Language: Português
- Abstract: Scratch2 é um fator de transcrição expresso em células recém-egressas do ciclo celular e tem um papel conservado na sobrevivência, diferenciação e migração celular. Scrt2 é expresso em uma população bem restrita de células localizadas na camada interna da zona intermediária do tubo neural em embriões de galinha, e seu padrão de expressão se mantem conservado em vertebrados. Os mecanismos que controlam a sua expressão ainda são desconhecidos e podem contribuir no entendimento sobre regulação gênica durante a diferenciação neural. Aqui, investigamos os mecanismos regulatórios pré- (enhancers e fatores de transcrição) e pós-transcricionais (miRNAs) envolvidos na expressão de cScrt2. Realizamos uma análise in silico e identificamos 1) um potencial elemento-cis conservado (E1), presente tanto em galinha quanto em camundongo, que pode estar envolvido na expressão de Scrt2; 2) Ascl1, Brn2 e Sox2 como fatores de transcrição candidatos a controladores à montante de Scrt2 na cascata gênica, e 3) sítios de ligação para miR-125b, -200b, -429, -211 e -204 na região 3UTR de cScrt2. Testamos a função biológica da região regulatória candidata E1 e da região 3UTR de Scrt2 pela eletroporação no tubo neural embrionário de galinha. A modulação de transcrição modulada por fatores de transcrição via E1 foi testada em ensaio luciferase em células HEK293T. Além disso, realizamos Chromosome Conformation Capture (3C) para verificar interações entre E1 e a região promotora de cScrt2, e utilizamos a metodologia CRISPR/Cas9 para editar E1 e sítios-alvo de miRNAs na 3UTR de cScrt2.Nossos resultados indicam que E1 é m enhancer neural, que dirige a expressão de Scrt2 possivelmente no domínio equatorial do tubo neural. A superexpressão dos fatores de transcrição selecionados, aumentou a expressão de cScrt2 na região dorsal do tubo neural e reduziu o número de subpopulações de células neurais diferenciadas. Além disso, a edição de sítios de miRNA mediada por CRISPR, aumentou a expressão de Scrt2, sugerindo um possível papel de miR-125b e -200b na regulação pós-transcricional de cScrt2. Por fim, propomos que o domino de expressão de cScrt2 seja gerado pela conjunção dos mecanismos de regulação pré- e pós-transcricionais. Neste cenário, E1 modula a transcrição de cSrt2 mediada pelos fatores de transcrição Ascl1 e Brn2. Após a transcrição, os níveis de cScrt2 seriam então delimitados pela ação de miR-125b e -200b na sua 3UTR
- Imprenta:
- Data da defesa: 06.09.2019
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ABNT
GOES, Carolina Purcell. Regulação pré- e pós-transcricional do gene Scratch2 durante a neurogênese no tubo neural posterior. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-12022020-153318/. Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Goes, C. P. (2019). Regulação pré- e pós-transcricional do gene Scratch2 durante a neurogênese no tubo neural posterior (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-12022020-153318/ -
NLM
Goes CP. Regulação pré- e pós-transcricional do gene Scratch2 durante a neurogênese no tubo neural posterior [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-12022020-153318/ -
Vancouver
Goes CP. Regulação pré- e pós-transcricional do gene Scratch2 durante a neurogênese no tubo neural posterior [Internet]. 2019 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-12022020-153318/ - Regulação da expressão do gene cScratch2 na embriogênese neural
- Scratch2, a snail superfamily member, is regulated by miR-125b
- ASCL1 promotes Scrt2 expression in the neural tube
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