Estudo dos perfis de N-glicosilação da prolactina recombinante humana expressa em células humanas HEK293 (2018)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, FELIPE DOUGLAS - IPEN
- Unidade: IPEN
- Subjects: PROLACTINA; RECOMBINAÇÃO GENÉTICA; HORMÔNIOS; DNA RECOMBINANTE; GAMETAS; TRANSFERASES; CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA
- Language: Português
- Abstract: A prolactina humana (hPRL) é um hormônio sintetizado pela hipófise com inúmeras funções tais como: lactação, reprodução e regulação osmótica. Este hormônio é frequentemente dosado em casos de problemas na lactação, infertilidade, além de estudos que elucidam sua ligação em alguns tipos de câncer (mama, próstata e útero). A hPRL é encontrada na forma não glicosilada (NG-hPRL) (23 kDa) e glicosilada (G-hPRL) (25 kDa), sendo a isoforma glicosilada um modelo ideal de análise de perfil de N-glicanos, já que possui um único sítio de glicosilação localizado na Asparagina 31. A glicosilação está relacionada diretamente à solubilidade, à estabilidade, ao enovelamento, à meia-vida e atividade biológica in vivo. As células de ovário de hamster chinês (CHO) e as células embrionárias de rim humano (HEK293) são os hospedeiros mais utilizados para expressão de proteínas recombinantes, já que podem ser cultivadas em altas densidades e por possuírem similaridade nas modificações pós-traducionais. O objetivo foi expressar, purificar e realizar uma caracterização físico-química e biológica da hPRL glicosilada de células HEK293, incluindo análise da estrutura de carboidratos. Para tanto, foi realizada uma transfecção em células HEK293T (aderidas) com o vetor pcDNA 3.4-TOPO. Foi obtida uma expressão de 21,26 ± 8,3 μg/mL de hPRL no meio condicionado sem soro. A hPRL foi purificada por cromatografia de afinidade a metais imobilizados (IMAC), eluindo 92% da hPRL em uma única fração que,analisada por HPSEC, apresentou pureza de 97%. O perfil de N-glicanos da amostra apresentou seis espécies, todas com terminação em ácido-siálico, do tipo complexo, sendo bi, tri e tetra-antenárias, com relativa predominância da espécie N2G2S1 (29,4%). A bioatividade in vitro da G-hPRL HEK293 demonstrou ser ≅ 16 vezes menor que a G-hPRL produzida em células CHO
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.07.2018
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ABNT
SILVA, Felipe Douglas. Estudo dos perfis de N-glicosilação da prolactina recombinante humana expressa em células humanas HEK293. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28092018-142442/. Acesso em: 01 jan. 2026. -
APA
Silva, F. D. (2018). Estudo dos perfis de N-glicosilação da prolactina recombinante humana expressa em células humanas HEK293 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28092018-142442/ -
NLM
Silva FD. Estudo dos perfis de N-glicosilação da prolactina recombinante humana expressa em células humanas HEK293 [Internet]. 2018 ;[citado 2026 jan. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28092018-142442/ -
Vancouver
Silva FD. Estudo dos perfis de N-glicosilação da prolactina recombinante humana expressa em células humanas HEK293 [Internet]. 2018 ;[citado 2026 jan. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-28092018-142442/
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