Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2) (2018)
- Authors:
- Autor USP: BARBOSA, FLÁVIA FERREIRA - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: GLICOPROTEÍNAS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; WESTERN BLOTTING; VÍRUS DA RAIVA; LYSSAVIRUS; DROSOPHILA; INSETOS
- Keywords: Células S2; Ectodomain; Ectodomínio; Glicoproteína; Glycoprotein; Lissavírus da Raiva; Rabies Lissavirus; S2 cells
- Language: Português
- Abstract: A raiva é uma doença tropical negligenciada (DTN) que acomete humanos, mamíferos silvestres e domésticos, cuja taxa de mortalidade mundial atinge aproximadamente 60.000 mortes humanas ao ano, o que a caracteriza como um sério problema de saúde pública, representando um grande impacto em populações mais vulneráveis, devido, principalmente, a fácil propagação de seu agente. O Lissavírus da raiva (RABV) sintetiza uma molécula glicoproteica, a RVGP (do inglês Rabies Lissavirus Glycoprotein), cuja porção exposta na superfície da membrana do vírus (chamada ectodomínio) tem função mediadora na adesão à célula hospedeira e na indução de anticorpos neutralizantes. Um controle efetivo frente a esta DTN pode ser alcançado quando abordagens em saúde pública são trabalhadas desenvolvendo, por exemplo, vacinas preventivas. Apesar do investimento, o controle da doença não tem sido o suficiente para conter sua distribuição. Desta forma, este projeto teve por objetivo otimizar a produção da molécula RVGP a partir do uso de sua porção antigênica, o ectodomínio, obtendo assim uma proteína heteróloga secretada. Para isso, foi utilizado um sistema de expressão de proteínas recombinantes baseado em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2 - S2), capaz de sintetizar de forma indutível esta molécula com possibilidade de desempenhar sua função biológica, contendo os epítopos antigênicos do lissavírus da raiva.A linhagem celular obtida através de transfecção com o agente Lipofectamine 2000 foi denominada S2MTBip_RVGP-ecto e expressa o ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva de forma secretada em diferentes condições de indução e tempos de coleta. A proteína foi detectada por análises de Dot blotting, Western blotting e quantificada por ELISA. Os resultados mostram a presença de uma banda correspondente a massa molecular de aproximadamente 51 kDa, presentes no sobrenadante das culturas, reconhecida por anticorpos monoclonais (C75 e D1) e soro. A subclonagem da população inicial de S2MTBip_RVGP-ecto permitiram a seleção de uma subpopulação recombinante (S2MTBip_RVGP-ectoG5), capaz de produzir mais rRVGP-ecto, sugerindo que os valores obtidos da proteína recombinante ainda podem ser melhorados
- Imprenta:
- Data da defesa: 01.11.2018
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ABNT
BARBOSA, Flávia Ferreira. Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2). 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13112019-105906/. Acesso em: 27 jan. 2026. -
APA
Barbosa, F. F. (2018). Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2) (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13112019-105906/ -
NLM
Barbosa FF. Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2) [Internet]. 2018 ;[citado 2026 jan. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13112019-105906/ -
Vancouver
Barbosa FF. Expressão do ectodomínio da glicoproteína do vírus da raiva em células de inseto (Drosophila melanogaster Schneider 2) [Internet]. 2018 ;[citado 2026 jan. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-13112019-105906/
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