Clonagem, expressão heteróloga e caracterização funcional de peptidase de Fusarium oxysporum em Pichia pastoris (2019)
- Authors:
- Autor USP: CAVALCANTI, MARIANA ANTÃO - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Subjects: COMPOSTOS ORGÂNICOS; ENZIMAS; INDÚSTRIA QUÍMICA; LEVEDURAS; DETERGENTES
- Keywords: Fusarium oxysporum; Peptidase; Pichia pastoris; Subtilisin; Subtilisina
- Language: Português
- Abstract: As peptidases são enzimas da classe das hidrolases que catalisam a quebra de ligações peptídicas de proteínas e peptídeos. Essas enzimas têm elevada relevância em aplicações industriais, sendo bastante utilizadas na produção de detergentes. Muitas enzimas são produzidas através da expressão heteróloga em P. pastoris, sistema de expressão heteróloga com propriedades vantajosas sobre outros sistemas. Diante da importância das enzimas em várias atividades biológicas e de suas possíveis aplicações na indústria, este trabalho teve como objetivo a obtenção de uma peptidase funcional de Fusarium oxysporum através da expressão heteróloga em sistema de P. pastoris. Este estudo realizou a clonagem gênica e produção de uma peptidase de F. oxysporum através de expressão heteróloga em P. pastoris. A peptidase em questão é uma subtilisina, que necessita da clivagem de sua pró-região inibitória para que exerça atividade. Desse modo optou-se por produzir a peptidase em sua forma madura recombinante (pMAD) como forma de obter a enzima funcional. Testou-se a expressão em Pichia pastoris de forma induzida, através do promotor pAOX1 e constitutiva, através do promotor pGAP, sendo que sua produção de forma constitutiva não foi possível. A peptidase produzida foi purificada por cromatografia de afinidade e apresentou atividade funcional evidenciada pela análise do efeito proteolítico. Além disso, a temperatura de 40 oC e o pH 8,0 foram identificados como condições ótimas para atividadeenzimática. Diante dos resultados apresentados pode-se dizer que este estudo contribui muito para o conhecimento científico e para a indicação de uma potencial molécula a ser empregada no desenvolvimento de produtos industrializados
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2019
- Data da defesa: 18.04.2019
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ABNT
CAVALCANTI, Mariana Antão. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização funcional de peptidase de Fusarium oxysporum em Pichia pastoris. 2019. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-04062019-141326/. Acesso em: 28 set. 2024. -
APA
Cavalcanti, M. A. (2019). Clonagem, expressão heteróloga e caracterização funcional de peptidase de Fusarium oxysporum em Pichia pastoris (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-04062019-141326/ -
NLM
Cavalcanti MA. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização funcional de peptidase de Fusarium oxysporum em Pichia pastoris [Internet]. 2019 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-04062019-141326/ -
Vancouver
Cavalcanti MA. Clonagem, expressão heteróloga e caracterização funcional de peptidase de Fusarium oxysporum em Pichia pastoris [Internet]. 2019 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-04062019-141326/
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