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Tese

Isolation and characterization of Cancer Associated Fibroblasts from canine Mast Cell Tumors and its influence on the malignancy of neoplastic cells: a combined molecular, pathologic and in vitro approach (2019)

  • Authors:
  • Autor USP: PULZ, LIDIA HILDEBRAND - FMVZ
  • Unidade: FMVZ
  • Sigla do Departamento: VPT
  • Subjects: CÃES; MASTOCITOMA ANIMAL; MATRIZ EXTRACELULAR; RNA
  • Keywords: Co-culture; Dog; Extracellular matrix; Myofibroblast; RNA-Seq
  • Agências de fomento:
  • Language: Inglês
  • Abstract: Os mastocitomas cutâneos (MCTs) são neoplasias comuns em cães e são considerados potencialmente malignos. Diversas pesquisas tentaram identificar biomarcadores para melhor predizer o comportamento biológico deste tumor. Além disso, estudos envolvendo o cultivo primário de MCTs caninos podem ser uma ferramenta valiosa para a análise das propriedades funcionais das células. O objetivo deste estudo foi identificar vias moleculares ligadas a características de malignidade histopatológicas, menor tempo de sobrevida e pior prognóstico associados ao MCT. Além disso, objetivamos investigar o comportamento de mastócitosin vitro obtidos a partir de MCTs de diferentes graus histopatológicos e determinar o tipo de interação com os fibroblastos estromais. Realizamos análises de expressão gênica em MCTs únicos obtidos de 15 cães e identificamos dois subtipos distintos de tumor alto risco e baixo risco - associados a diferenças nos graus histológicos, tempos de sobrevida, índices Ki67 e ocorrência de morte devido a doença. Análises comparativas de perfis de sequência de RNA revelaram 71 genes diferencialmente expressos entre MCTs de alto e baixo risco. Ademais, examinamos redes de co-expressão gênica para explorar as funções biológicas dos genes identificados. A construção da rede revelou 63 módulos gênicos, dos quais 4 foram significativamente associados ao grupo mais agressivo. Dois dos módulos gênicos positivamente correlacionados com MCTs de alto risco também foram associados àproliferação celular e à matriz extracelular. No topo do módulo de matriz extracelular, foram identificados genes com funções diretamente relacionadas àqueles de fibroblastos associados ao câncer (CAFs). Análises imuno-histoquímicas também revelaram um maior número de CAFs em MCTs de alto risco. Os experimentos de cultivo foram feitos imediatamente após a ressecção cirúrgica e as células foram cultivadas em DMEM-F12 completo por 4 a 7 passagens. Os mastócitos foram evidenciados por coloração com Romanowsky e azul de toluidina com perda progressiva de seus grânulos em cultivo. A confirmação de fibroblastos como células aderentes foi feita por qRT-PCR para o gene da Proteína Específica de Fibroblastos 1 (FSP1). A caracterização dos fibroblastos cultivados como miofibroblastos foi realizada por imunofluorescência para -actina de músculo liso (SMA) e vimentina. A percentagem de 9 células viáveis no sobrenadante foi determinada a cada passagem. Durante as 4-10 semanas de cultivo sem adição de fatores de crescimento ou citocinas, a população de mastócitos vivos diminuiu progressivamente e os fibroblastos e miofibroblastos continuam a crescer até a senescência. Amostras de MCTs de alto grau foram viáveis por períodos mais curtos (P =0.0442) e menor número de passagens (P<0.0001). Examinamos também os efeitos a curto prazo dos fibroblastos estromais na viabilidade dos mastócitos neoplásicos em diferentes condições de culturas. O contato célula-célula foi a melhor condição emque maior proporção de mastócitos neoplásicos permaneceu viável em comparação com todas as outras condições, isto é, utilizando-se de inserto e no cultivo de mastócitos isolados (P<0.05). Verificamos também que os mastócitos neoplásicos não ficam viáveis por mais de 4 dias na ausência de fibroblastos ou de seus fatores solúveis. Estes resultados indicam uma importante interação entre os mastócitos e os fibroblastos, que podem ocorrer no microambiente tumoral
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 15.03.2019
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      PULZ, Lidia Hildebrand. Isolation and characterization of Cancer Associated Fibroblasts from canine Mast Cell Tumors and its influence on the malignancy of neoplastic cells: a combined molecular, pathologic and in vitro approach. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-29082019-110458/. Acesso em: 20 set. 2024.

    • APA

      Pulz, L. H. (2019). Isolation and characterization of Cancer Associated Fibroblasts from canine Mast Cell Tumors and its influence on the malignancy of neoplastic cells: a combined molecular, pathologic and in vitro approach (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-29082019-110458/

    • NLM

      Pulz LH. Isolation and characterization of Cancer Associated Fibroblasts from canine Mast Cell Tumors and its influence on the malignancy of neoplastic cells: a combined molecular, pathologic and in vitro approach [Internet]. 2019 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-29082019-110458/

    • Vancouver

      Pulz LH. Isolation and characterization of Cancer Associated Fibroblasts from canine Mast Cell Tumors and its influence on the malignancy of neoplastic cells: a combined molecular, pathologic and in vitro approach [Internet]. 2019 ;[citado 2024 set. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-29082019-110458/

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