Expressão heteróloga e caracterização bioquímica de uma xilooligossacarídeo oxidase de Thielavia terrestris pertencente à família AA7 (2018)
- Authors:
- Autor USP: LIMA, AWANA DA SILVA - EEL
- Unidade: EEL
- Sigla do Departamento: LOT
- Assunto: ENZIMAS
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: A biomassa vegetal pode ser uma importante fonte de obtenção de diversos produtos a partir da desestruturação de suas frações por um vasto grupo de enzimas. No entanto, a geração de compostos de alto valor agregado a partir da biomassa lignocelulósica requer o desenvolvimento de novos sistemas enzimáticos. Pensando nisso, a prospecção e a caracterização de novas enzimas que estão presentes no secretoma de fungos degradadores da biomassa lignocelulósica tem sido fonte de pesquisa por pesquisadores do mundo todo. O objetivo deste trabalho foi prospectar, clonar e expressar de maneira heteróloga o gene codificante de uma enzima putativa do fungo termofílico T. terrestris em cepas do fungo filamentoso A. nidulans A773 e promover sua caracterização bioquímica e biofísica. O gene da enzima foi amplificado, clonado e inserido no vetor pEXPYR antes de ser inserido no sistema de expressão do A. nidulans. Os transformantes obtidos foram induzidos em meio mínimo de cultivo contendo 3% (m/v) de maltose e 1% (m/v) de glicose em meio estacionário para a produção, seguido da purificação da enzima. Estudos bioquímicos foram realizados para determinar o pH e a temperatura ótima de reação, bem como, a especificidade aos substratos e a determinação dos parâmetros cinéticos. A termoestabilidade da enzima também foi avaliada por estudo de dicroísmo circular (DC). Além disso, foi avaliado o efeito colaborativo entre uma xilanase GH10 e a enzima em estudo na hidrólise do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado. A enzima obtida por expressão heteróloga foi caracterizada como uma xilo-oligossacarídeo oxidase (XylO). Por meio da análise filogenética das sequências de aminoácidos entre a enzima expressa e outras enzimas oxidativas, a XylO foi classificada como pertencente a família das flavoproteínas e subfamília das BBE. A enzima TtXylO demonstrou ter especificidade em oligossacarídeos dede C5 apresentando boa atividade enzimática em substratos complexos de xilana. A enzima possui pH ótimo de 5,5 e temperatura ótima de 25 ºC. As análises de DC indicaram temperatura de desnaturação de 62,7 ºC, caracterizando esta enzima como termofílica. Contudo, novos estudos ainda são necessários para avaliar os produtos gerados a partir da oxidação dos diferentes xilo-oligossacarídeos pela XylO e seu potencial uso na indústria
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.07.2018
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ABNT
LIMA, Awana da Silva. Expressão heteróloga e caracterização bioquímica de uma xilooligossacarídeo oxidase de Thielavia terrestris pertencente à família AA7. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Lorena, 2018. . Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Lima, A. da S. (2018). Expressão heteróloga e caracterização bioquímica de uma xilooligossacarídeo oxidase de Thielavia terrestris pertencente à família AA7 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Lorena. -
NLM
Lima A da S. Expressão heteróloga e caracterização bioquímica de uma xilooligossacarídeo oxidase de Thielavia terrestris pertencente à família AA7. 2018 ;[citado 2025 dez. 27 ] -
Vancouver
Lima A da S. Expressão heteróloga e caracterização bioquímica de uma xilooligossacarídeo oxidase de Thielavia terrestris pertencente à família AA7. 2018 ;[citado 2025 dez. 27 ] - Desenvolvimento de uma cell factory a partir do fungo termofílico Thermothielavioides terrestris
- Desenvolvimento de um cell factory a partir do fungo termofílico Thermothielavioides terrestris
- System biology in lignocellulose and algae refineries
- Oxidative Machinery of basidiomycetes as potential enhancers in lignocellulosic biorefineries: A lytic polysaccharide monooxygenases approach
- Heterologous expression and functional characterization of a GH10 endoxylanase from Aspergillus fumigatus var. niveus with potential biotechnological application
- Functional characterization of a novel thermophilic exo-arabinanase from Thermothielavioides terrestris
- The use of synthetic biology tools in biorefineries to increase the building blocks diversification
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