Estudo funcional e estrutural dos reguladores da biossíntese do Pilus Tipo IV de Xanthomonas citri subsp. citri (2019)
- Authors:
- Autor USP: CORNEJO, EDGAR ENRIQUE LLONTOP - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: XANTHOMONAS; BIOQUÍMICA
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: O pilus tipo IV (T4P) são finos e flexíveis filamentos encontrados na superfície de uma ampla gama de bactérias Gram-negativas, Gram-positivas e archaea. O T4P desempenha um rol crucial no estilo de vida bacteriano ao estar envolvido em uma variedade de funções incluindo motilidade, aderência, formação de biofilme, patogenicidade, transformação natural e na infecção por fagos. Várias das proteínas requeridas para a biossíntese e regulação do T4P se estendem através do periplasma conectado a membrana interna e externa. O T4P são estruturas dinâmicas que sofrem ciclos de extensão e retração energizados por duas ATPases associadas com a membrana interna bacteriana. Durante a extensão, PilB, a ATPase de biossíntese do T4P, estimula a polimerização do pilus a partir de monômeros de pilinas localizados na membrana interna, através de um mecanismo ainda desconhecido. Duas proteínas, FimX e PilZ estão envolvidas na regulação da biossíntese do T4P via interações com PilB e nocautes de esses genes acabam com a biogênese e função do T4P. Neste trabalho, nós determinamos a estrutura cristalográfica do complexo binário formado pelo domínio N-terminal de PilB (PilBNt, resíduos 12-163) e a PilZ com uma resolução de 1.7 Å. As interações entre PilB e PilZ envolve uma superfície hidrofóbica formada por aminoácidos altamente conservados na família não canônica de domínios PilZ. Mutações ou deleções de alguns destes resíduos em PilZ enfraquecem a interação PilB-PilZ e afeta a função do T4P. Nós também observamos que esta interação induz mudanças conformacionais no domínio PilBNt, revelando a possibilidade de um rearranjo estrutural funcionalmente relevante da região Nterminal de PilB permitindo a sua interação com PilM, conectando a ATPase PilB como a maquinaria do T4P. Nós mostramos que PilB, PilZ e FimX podem formar um complexo ternário estável com umamassa molar aparente de ~600 kDa, sugerindo uma estequiometria de 6PilB:6PilZ:2FimX. Também observamos que FimX incrementa a atividade ATPase do complexo PilB-PilZ. O c-di-GMP e o ATPγS (um análogo não hidrolisável do ATP) induz mudanças conformacionais em FimX e no complexo PilB-PilZ, respectivamente, e estabiliza o complexo ternário PilB-PilZ-FimX. Além disso, PilB, PilZ e FimX localizam em um dos polos da célula (polo líder) em células de X. citri e a localização polar dirige a orientação da motilidade twitching. Finalmente, o T4P é necessário para a exitosa infecção de X. citri pelo fago ΦXacm4-11. Nossos resultados sugerem que asinterações entre PilB-PilZ-FimX estariam envolvidas na regulação da função de PilB, onde sinais especificas sentidas pelos domínios de FimX seriam transmitidas por PilZ até PilB
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.06.2019
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ABNT
CORNEJO, Edgar Enrique Llontop. Estudo funcional e estrutural dos reguladores da biossíntese do Pilus Tipo IV de Xanthomonas citri subsp. citri. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01082019-133129/. Acesso em: 11 fev. 2026. -
APA
Cornejo, E. E. L. (2019). Estudo funcional e estrutural dos reguladores da biossíntese do Pilus Tipo IV de Xanthomonas citri subsp. citri (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01082019-133129/ -
NLM
Cornejo EEL. Estudo funcional e estrutural dos reguladores da biossíntese do Pilus Tipo IV de Xanthomonas citri subsp. citri [Internet]. 2019 ;[citado 2026 fev. 11 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01082019-133129/ -
Vancouver
Cornejo EEL. Estudo funcional e estrutural dos reguladores da biossíntese do Pilus Tipo IV de Xanthomonas citri subsp. citri [Internet]. 2019 ;[citado 2026 fev. 11 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01082019-133129/ - Structural basis of bacterial type IV pilus biogenesis
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