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Tese

Silenciamento de genes de Diaphorina citri Kuwayama por RNA de interferência (2019)

  • Authors:
  • Autor USP: MENDONÇA, JÉSSIKA ANGELOTTI - ESALQ
  • Unidade: ESALQ
  • Sigla do Departamento: LPV
  • Subjects: BACTÉRIAS FITOPATOGÊNICAS; EXPRESSÃO GÊNICA; FRUTAS CÍTRICAS; GREENING (DOENÇA DE PLANTA); INSETOS VETORES
  • Keywords: Psilídeo-asiático-dos-citros; RNAi
  • Language: Português
  • Abstract: O aumento da incidência da doença huanglonbing (HLB) nos pomares brasileiros tem contribuído significativamente para o aumento do custo de produção de laranja no Brasil, devido à suscetibilidade de todas as variedades cultivadas. O HLB é associado às bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus, Candidatus Liberibacter africanus e Candidatus Liberibacter americanus, transmitidas pelos psilídeos Diaphorina citri e Trioza erytreae. No Brasil, o inseto vetor responsável pela rápida disseminação da doença é o psilídeo Diaphorina citri. Os principais métodos de controle do HLB são a eliminação de plantas sintomáticas, uso de mudas sadias e controle do vetor. O uso de plantas geneticamente modificadas pode ser uma alternativa ao uso excessivo de inseticidas para controle do inseto vetor. Sendo assim, pode-se adotar uma nova tecnologia que se baseia no uso de RNAs de interferência (RNAi) para o silenciamento de genes específicos do inseto vetor. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do silenciamento dos genes calreticulina (DcCRT), lacase (DcLAC) e Snf7 (DcSNF7) de Diaphorina citri por RNA de interferência via alimentação em folhas destacadas de Murraya paniculata que absorveram solução contendo dsRNA de silenciamento. A princípio, foi avaliada a expressão dos genes candidatos em diferentes estádios fenológicos dos insetos. Em seguida, foram realizados bioensaios de sobrevivência e silenciamento, com as doses 0, 5, 25 e 50µg de dsRNA. A sobrevivência dosinsetos foi avaliada ao longo de 144 horas, enquanto que os insetos utilizados na análise de expressão gênica foram coletados 12, 24, 48, 72 e 96h após o início da alimentação. Para os genes DcCRT, relacionado à quelatização de íons cálcio, e DcLAC, relacionado à gelificação oxidativa do estilete, ambos envolvidos no processo alimentar do inseto, também foi observado o efeito das doses de dsRNA na quantidade de alimento ingerido, 120h após o início da alimentação. Além disso, também foi realizado bioensaio com dsRNA Cy3-labbled, para verificar a distribuição do dsRNA absorvido. A expressão dos genes candidatos, de modo geral, se manteve uniforme ao longo dos estádios de desenvolvimento dos insetos, exceto para o gene DcLAC que apresentou maior expressão em adultos recém emergidos do que nos demais estádios avaliados. Nos bioensaios com dsRNA de silenciamento, observou-se fenótipo letal apenas com o silenciamento do gene DcSnf7, 144 horas após o início da alimentação. Durante o período avaliado, foi constatada redução na expressão gênica apenas de DcCRT, após 12h de alimentação e DcLAC após 96h de alimentação com seus respectivos dsRNA de silenciamento. Além disso, a dose de 5µg de dsRNA foi suficiente para causar tal efeito de silenciamento gênico. No bioensaio para quantificação da alimentação, observou- se redução na excreção de aminoácidos nos insetos alimentados com 5µg de dsRNA, em ambos os genes candidatos (DcCRT e DcLAC) 120h após o início da alimentação.Adicionalmente, a análise de distribuição de dsRNA pela folha mostrou que há absorção do dsRNA pela folha destacada, permitindo a alimentação pelo inseto. Dessa forma, conclui-se que os genes estudados apresentam potencial para o controle do psilídeo Diaphorina citri, via silenciamento gênico por RNAi
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 29.04.2019
    • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      MENDONÇA, Jéssika Angelotti. Silenciamento de genes de Diaphorina citri Kuwayama por RNA de interferência. 2019. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2019. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11136/tde-15082019-161448/. Acesso em: 09 out. 2024.

    • APA

      Mendonça, J. A. (2019). Silenciamento de genes de Diaphorina citri Kuwayama por RNA de interferência (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11136/tde-15082019-161448/

    • NLM

      Mendonça JA. Silenciamento de genes de Diaphorina citri Kuwayama por RNA de interferência [Internet]. 2019 ;[citado 2024 out. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11136/tde-15082019-161448/

    • Vancouver

      Mendonça JA. Silenciamento de genes de Diaphorina citri Kuwayama por RNA de interferência [Internet]. 2019 ;[citado 2024 out. 09 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11136/tde-15082019-161448/

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