Vesículas de membrana externa (OMV) de Neisseria lactamia: processo de obtenção e avaliação do potencial adjuvante (2018)
- Authors:
- Autor USP: GARCIA, MARIANA WATANABE - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS; STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE; REATORES BIOQUÍMICOS; LEVEDURAS; AMINOÁCIDOS
- Keywords: Neisseria lactamica; Neisseria lactamica; Streptococcus pneumoniae; Streptococcus pneumoniae; Adjuvant; Cinética de Cultivo; Função Adjuvante; Kinetics; OMV; OMV; Outer Membrane Vesicles; Vesículas de Membrana Externa
- Language: Português
- Abstract: Vesículas de membrana externa, OMV, são formadas a partir de evaginações da membrana externa de bactérias Gram-negativas e têm ganhado interesse em suas funções biológicas por serem uma alternativa ao desenvolvimento de novas estratégias e combinações vacinais. OMV da bactéria comensal Neisseria lactamica induzem anticorpos que possuem reatividade cruzada com N. meningitidis e podem ser, além de antígeno para a doença meningocócica, um potencial adjuvante de mucosa. O objetivo deste trabalho é estabelecer condições de cultivo de N. lactamica para a obtenção de OMV e avaliar a função adjuvante destas OMV em combinação com o antígeno de superfície, PspA5, de Streptococcus pneumoniae. Foram realizados cultivos descontínuos em biorreatores de 5L por 10-15h. O meio de Catlin, MC, teve a concentração do substrato fonte de carbono (lactato) e aminoácidos modificada, além do acréscimo de extrato de levedura. Foram monitorados temperatura, pH, agitação e oxigênio dissolvido. Amostras foram coletadas a cada hora para análise de biomassa, consumo de nutrientes, produção de ácidos e concentração das OMV. Foram determinados os parâmetros cinéticos de produtividade máxima de células (ProdXmáx) e de produto (ProdPmáx), fatores de conversão (Yx/s, Yp/s e Yp/x) e velocidade de crescimento (Xmáx).O meio MC3LA2AA2YE (12h), com 18,0 g/L de lactato e o dobro da concentração original dos aminoácidos do MC foi o melhor, quando comparado aos demais para a obtenção de OMV. N. lactamica, cultivada nesta condição, apresentou produtividade máxima de OMV de 30,66 mg OMV/L.h, e concentração de OMV de 340,43 mg/L, na 11ª hora de cultivo. Os ensaios imunológicos foram realizados com a formulação de OMV puras ou OMV tratadas com detergente, para a retirada de parte do lipooligossacarídeo (LOS), em combinação com a proteína PspA5 de S. pneumoniae. O esquema de imunização foi de duas doses via intranasal, em modelo murino. Foram avaliados a indução de anticorpos IgG anti-PspA5 e o potencial protetor das formulações. Os grupos vacinais com adjuvante apresentaram indução de anticorpos IgG anti-PspA5 de aproximadamente 105ng/mL e sobrevivência de 100%, 75% e 66,7%, respectivamente, para PspA5-OMVp, PspA5-OMVt0,5%, e PspA5-OMVt0,3% Os resultados evidenciam atividade adjuvante determinante das OMV em combinação com a proteína heteróloga PspA5 e proteção contra o desafio de Streptococcus pneumoniae em modelo murino.
- Imprenta:
- Data da defesa: 10.04.2018
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ABNT
GARCIA, Mariana Watanabe. Vesículas de membrana externa (OMV) de Neisseria lactamia: processo de obtenção e avaliação do potencial adjuvante. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-07062019-100400/. Acesso em: 28 mar. 2024. -
APA
Garcia, M. W. (2018). Vesículas de membrana externa (OMV) de Neisseria lactamia: processo de obtenção e avaliação do potencial adjuvante (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-07062019-100400/ -
NLM
Garcia MW. Vesículas de membrana externa (OMV) de Neisseria lactamia: processo de obtenção e avaliação do potencial adjuvante [Internet]. 2018 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-07062019-100400/ -
Vancouver
Garcia MW. Vesículas de membrana externa (OMV) de Neisseria lactamia: processo de obtenção e avaliação do potencial adjuvante [Internet]. 2018 ;[citado 2024 mar. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-07062019-100400/
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