Mapeamento das bases estruturais e suas correlações com patogenias humanas associadas à mutações na fumarase humana (2018)
- Autores:
- Autor USP: ALEIXO, MARIANA ARAÚJO AJALLA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 602
- Assuntos: FARMÁCIA; FÍSICA; BIOLOGIA; DOENÇAS RARAS; CRISTALOGRAFIA; CINÉTICA; ENZIMAS
- Palavras-chave do autor: Cinética enzimática; Fumarato hidratase; Termoflúor; Enzymatic kinetics; Fumarate hydratase; Rare diseases; Thermofluor
- Agências de fomento:
- Idioma: Português
- Resumo: Fumarato hidratases ou fumarases (FH) catalisam a reação estereoespecífica reversível de hidratação do fumarato em L-malato. Essas enzimas se apresentam em todas as classes de organismos, desde procariotos a eucariotos, e podem ser encontradas nas formas mitocondrial e citosólica. A enzima tem papel importante na produção de energia pois participa do ciclo do ácido cítrico, na resposta ao dano do DNA e como supressor tumoral. A fumarase humana (HsFH), que pertence à classe II, é codificada pelo gene 1q42.1, possui 467 aminoácidos em cada monômero com peso molecular de 50,2 kDa cada. Estudos associaram mutações no gene da FH com diversas doenças humanas como acidúria fumárica, leiomiomatoses de útero e pele (MCUL), que quando associadas com um agressivo carcinoma múltiplo de células é conhecido como leiomiomatose hereditário e câncer renal (HLRCC). Apesar da grande importância da fumarase humana no metabolismo energético, ainda há pouca informação em relação ao mecanismo catalítico adotado pela enzima e o efeito estrutural e cinética causado pelas mutações envolvidas com essas doenças. Diante disso, nosso trabalho utilizou uma abordagem híbrida que envolve a caracterização biofísica, bioquímica e estrutural da enzima HsFH, e seus mutantes: N107THsFH, H180RHsFH, Q185RHsFH, K230RHsFH, G282VHsFH, E362QHsFH, S365GHsFH e N373DHsFH, identificados em pacientes. Estudos cinéticos foram realizados em sete diferentes pHs e, pela primeira vez para fumarases, o ensaio foi realizado com os dois substratos presentes na mesma mistura reacional, confirmando a contribuição da reação reversa para a velocidade global da enzima. De acordo com os estudos de termoflúor a proteína é estabilizada em pHs alcalinos e através da ligação de compostos no sítio ativo. A estrutura da enzima HsFH nativa foi resolvida a 1,8 A e identificou a presença de moléculas de HEPEScomplexadas na região C-terminal da enzima. Os estudos cinéticos demonstraram um aumento da eficiência catalítica na presença do HEPES, sugerindo um possível papel alostérico de seu sítio de ligação para a atividade catalítica. Foram determinadas as estruturas para os mutantes N107THsFH, H180RHsFH, Q185RHsFH, K230RHsFH, E362QHsFH, S365GHsFH e N373DHsFH. As mutações Q185R, E362Q, S365G e N373D foram identificadas no sítio ativo afetando diretamente a capacidade da proteína em ligar os substratos, enquanto que a mutação H180R foi localizada no sítio B, que conduz os substratos e produtos para dentro e fora do sítio ativo. Já a mutação K230R está localizada no domínio central, mas os resultados de termoflúor demonstram um efeito direto na capacidade da enzima em acomodar o substrato. A mutação N107T, localizada longe do sítio ativo foi a única que permaneceu ativa e teve seus parâmetros cinéticos residuais determinados. O presente trabalho contribui para o entendimento das bases estruturais que correlacionam mutações na HsFH, deficiência enzimática e patologia
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2018
- Data da defesa: 19.10.2018
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ABNT
ALEIXO, Mariana Araújo Ajalla. Mapeamento das bases estruturais e suas correlações com patogenias humanas associadas à mutações na fumarase humana. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-23052019-093047/. Acesso em: 01 nov. 2024. -
APA
Aleixo, M. A. A. (2018). Mapeamento das bases estruturais e suas correlações com patogenias humanas associadas à mutações na fumarase humana (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-23052019-093047/ -
NLM
Aleixo MAA. Mapeamento das bases estruturais e suas correlações com patogenias humanas associadas à mutações na fumarase humana [Internet]. 2018 ;[citado 2024 nov. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-23052019-093047/ -
Vancouver
Aleixo MAA. Mapeamento das bases estruturais e suas correlações com patogenias humanas associadas à mutações na fumarase humana [Internet]. 2018 ;[citado 2024 nov. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-23052019-093047/
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