Avaliação do impacto do cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos isolados sobre a qualidade dos oócitos recuperados (2018)
- Authors:
- Autor USP: BATISTA, LUCIENE APARECIDA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGO
- Subjects: OÓCITOS; FERTILIZAÇÃO "IN VITRO" ANIMAL; MITOCÔNDRIAS; FOLÍCULO OVARIANO
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: INTRODUÇÃO: Os programas de preservação de fertilidade baseados na criopreservação de gametas e tecido ovariano têm sido amplamente empregados para salvaguardar o potencial reprodutivo de mulheres em idade reprodutiva. Entretanto,o risco de reintrodução de células malignas após o reimplante do tecido e a dificuldade de aplicação dos protocolos de estimulação ovariana em pacientes estrogênio dependentes, dificultam o acesso destas pacientes aos programas de preservação de fertilidade já estabelecidos. O cultivo de folículos isolados vem se mostrando uma técnica promissora capaz de atender a essas pacientes, com resultados bastante satisfatórios. A recuperação de oócitos fertilizáveis tem se mostrado bem sucedida em camundongos resultando em nascidos vivos; já em outros mamíferos de grande porte,como primatas não humanos e humanos,há escassos relatos da obtenção de oócitos em estagio MII . OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo analisar a eficiência do cultivo tridimensional in vitro no desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos e a sua influência sobre o metabolismo oxidativo, a geração de estresse oxidativo celular e os níveis de transcritos de genes ligados atividade mitocondrial, apoptose e crescimento e desenvolvimento oocitário. MATERIAL E MÉTODOS: Foi realizado o cultivo in vitro tridimensional de folículos secundários bovinos por 16 dias em meio ?- MEM suplementado, em atmosfera de 5% de CO2 e 20% de O2 (Grupo in vitro - Gvt). Como controles foram incluídos doisgrupos: um de folículos secundários isolados frescos não submetidos a cultivo (Grupo imaturos- GI) e outro de folículos extraídos já em estágios pré-antrais mais avançados do desenvolvimentos (Grupo in vivo- Gvv). Para a avaliação do desenvolvimento folicular, foram realizadas análises morfológica e testes de viabilidade, além da expressão por RT- qPCR de genes alvos para a atividade mitocondrial e estresse oxidativo. RESULTADOS: As análises do desenvolvimento dos folículos in vitro mostraram que 81,1% dos folículos secundários apresentaram crescimento, com uma taxa de viabilidade em torno de 84%. Cerca de 50% de oócitos recuperados após o cultivo estavam viáveis pela avaliação morfológica, embora nenhum deles tenha atingido o estágio final de maturação (MII). Além disso, o cultivo não promoveu aumento da expressão de genes ligados a apoptose o que também sugere uma boa viabilidade dos folículos cultivados. O mesmo não ocorreu com o sistema Kit Ligand e c-Kit, considerados como marcadores da capacidade global de crescimento e desenvolvimento folicular, verificou-se uma menor expressão de KL nas células somáticas da parede folicular. Com relação ao metabolismo oxidativo, embora o estado redox, marcado pela produção de NAD e FAD, estivesse bastante aumentado nos folículos produzidos in vitro quando comparado com o controle imaturo fresco e maturado in vivo, não se observou aumento das espécies reativas de oxigênio em oócitos obtidos destes mesmos folículos, podendo sugerir amanutenção da capacidade de controlar o balanço oxidativo por parte destas células. ,Também não houve alteração na expressão de genes ligados à biogênese mitocondrial entre os grupos estudos. CONCLUSÃO: O método de cultivo proposto neste estudo, utilizando o sistema 3D em matriz de gel de alginato, permitiu a maturação parcial de folículos secundários isolados, mantendo a viabilidade e características do metabolismo oxidativo semelhantes a folículos maturados in vivo de mesmo tamanho. Entretanto, há algum grau de comprometimento na saúde global do folículo, especialmente em relação às células somáticas da parede folicular
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 15.08.2018
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ABNT
BATISTA, Luciene Aparecida. Avaliação do impacto do cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos isolados sobre a qualidade dos oócitos recuperados. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-20112018-111609/. Acesso em: 05 nov. 2024. -
APA
Batista, L. A. (2018). Avaliação do impacto do cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos isolados sobre a qualidade dos oócitos recuperados (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-20112018-111609/ -
NLM
Batista LA. Avaliação do impacto do cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos isolados sobre a qualidade dos oócitos recuperados [Internet]. 2018 ;[citado 2024 nov. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-20112018-111609/ -
Vancouver
Batista LA. Avaliação do impacto do cultivo in vitro de folículos pré-antrais bovinos isolados sobre a qualidade dos oócitos recuperados [Internet]. 2018 ;[citado 2024 nov. 05 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-20112018-111609/
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