Immunoproteomic characterization of Brucella canis to identify proteins candidates as antigens for serodiagnosis (2018)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, DAVID ATTUY VEY DA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Subjects: CÃES; TESTES SOROLÓGICOS; GENÓTIPOS
- Keywords: Brucella canis; Dogs; Genotyping; Immunoproteomic; Serological tests
- Language: Inglês
- Abstract: A brucelose canina é uma doença zoonótica, causada pela Brucella canis, que é uma das principais causas de abortamentos e infertilidade em cães. O objetivo deste estudo foi investigar um surto de B. canis em um canil, caracterizar os isolados de Brucella obtidos e identificar proteínas de B. canis reagentes especificamente a anticorpos de cães naturalmente infectados. O canil é localizado em São Paulo, SP, Brasil e no momento da amostragem, em 2014, o canil era composto por 17 cães adultos da raça Pug. Amostras de sangue foram utilizadas tanto para isolar as bactérias quanto para detectar o DNA de Brucella spp. pela reação em cadeia pela polimerase. Amostras de soro foram utilizadas para detectar anticorpos contra B. canis nos soros dos cães, utilizando um teste imunocromatográfico, o teste de soroaglutinação rápida em placa com ou sem 2-mercaptoetanol e dois kits de ELISA. Os isolados foram caracterizados pelos métodos bacteriológicos clássicos, espectrometria de massa e pelo sequenciamento do genoma completo. O conteúdo proteico total dos isolados de B. canis foi extraído e as proteínas separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida de uma e duas dimensões (1D e 2D, respeectivamente), sendo então testadas frente aos soros dos cães infectados (com ou sem bacteremia) e não infectados, utilizando Western Immunoblotting. Os spots proteicos reagentes foram identificados usando espectrometria de massa por ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF MS).Secreção vaginal, aborto, natimorto, falha na concepção e linfoadenopatia foram os sinais clínicos observados nos cães infectados. Coco-bacilos gram-negativos foram isolados em 24 amostras de sangue. Anticorpos contra B. canis foram observadas em todos os cães, em pelo menos uma amostragem, pelos testes sorológicos empregados. A MS atribuiu todos os isolados ao gênero Brucella. Os dados fenotípicos identificaram claramente B. canis com apenas pequenas diferenças nos padrões de lise por fagos. Os spots de proteínas, separados por 2D, foram identificados por MALDI-TOF MS como 93 diferentes proteínas, dentre elas, 19 foram identificadas em cães infectados (com ou sem bacteremia) e não foram identificadas nos cães não infectados. Tais proteínas são candidatas a serem utilizadas como antígenos para o aprimoramento do sorodiagnóstico, uma vez que a existência de um diagnóstico confiável constitui uma medida essencial para o controle e a prevenção da brucelose canina. A abordagem múltipla utilizada, envolvendo métodos microbiológicos clássicos, espectrometria de massa e sequenciamento completo do genoma bacteriano possibilitou a caracterização dos isolados de B. canis com elevado poder discriminatório, o que pode auxiliar em investigações de surtos
- Imprenta:
- Publisher place: Pirassununga
- Date published: 2018
- Data da defesa: 17.07.2018
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ABNT
SILVA, David Attuy Vey da. Immunoproteomic characterization of Brucella canis to identify proteins candidates as antigens for serodiagnosis. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-05112018-122925/. Acesso em: 04 out. 2024. -
APA
Silva, D. A. V. da. (2018). Immunoproteomic characterization of Brucella canis to identify proteins candidates as antigens for serodiagnosis (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Pirassununga. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-05112018-122925/ -
NLM
Silva DAV da. Immunoproteomic characterization of Brucella canis to identify proteins candidates as antigens for serodiagnosis [Internet]. 2018 ;[citado 2024 out. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-05112018-122925/ -
Vancouver
Silva DAV da. Immunoproteomic characterization of Brucella canis to identify proteins candidates as antigens for serodiagnosis [Internet]. 2018 ;[citado 2024 out. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-05112018-122925/
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