Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão (2018)
- Authors:
- Autor USP: REZENDE, ALEXANDRE GONçALVES DE - Interunidades em Biotecnologia
- Unidade: Interunidades em Biotecnologia
- Subjects: BACULOVIRIDAE; WESTERN BLOTTING; VACINAS VIRAIS; IMUNOFLUORESCÊNCIA; LEVEDURAS; MICROSCOPIA ELETRÔNICA
- Keywords: Pichia pastoris; Pichia pastoris; Virus like particles (VLPs); Baculovirus; Baculovírus; Mayaro virus; vírus Mayaro; Virus like particles (VLPs)
- Language: Português
- Abstract: Recentemente, vários arbovírus têm acometido a população de países emergentes ocasionando sérios problemas de saúde pública, como as doenças causadas pelos vírus da dengue, Chikungunya, Zika e febre amarela. Um vírus emergente e já circulante no Brasil, chamado Mayaro (MAYV), do mesmo gênero do Chikungunya (Alphavirus), possui potencial prejudicial semelhante a esses já estabelecidos. Seu vetor de transmissão é o mosquito do gênero Haemagogus, característico de regiões isoladas, principalmente florestas. Entretanto, estudos demonstraram que o Aedes aegypti é um competente vetor desse agente, o que possibilita sua disseminação em regiões urbanas. O presente trabalho avaliou a expressão das proteínas estruturais do vírus Mayaro (E1, E2, E3, C e 6K), utilizando dois sistemas de expressão distintos, um baseado na levedura Pichia pastoris, e outro derivado de Baculovírus (BEVS). Essa estratégia foi estabelecida para que a expressão dessas proteínas promova a formação de partículas semelhantes ao vírus (virus like particles), estruturas multiprotéicas que mimetizam a conformação de uma partícula viral podendo ser utilizada como um candidato vacinal. O trabalho evidenciou a correta obtenção de organismos recombinantes em ambos os sistemas, com a avaliação da expressão sendo feita com técnicas de dot blot, western blot e imunofluorescência indireta (IFI). Com o sistema baculovírus, foram avaliadas as linhagens Sf-9 e Hi-5, sendo evidenciada a expressão de proteínas do MAYV em ambas, utilizando MOI 10 e tempos pós-infecção de 96 e 72 h, respectivamente.A correta expressão das proteínas de MAYV também foi evidenciada com a levedura Pichia pastoris, com cultivo a 30 ºC e tempo de análise 48 h após indução. A geração de VLPs foi avaliada em amostras de sobrenadantes de ambos os sistemasapós a concentração por ultracentrifugação em gradiente de iodixanol, e análise por microscopia eletrônica de transmissão, sendo observadas nos dois sistemas com tamanhos variando entre 30-60 nm. Os resultados desse projeto podem gerar ferramentas importantes no desenvolvimento de kits diagnósticos e métodos vacinais contra o MAYV
- Imprenta:
- Data da defesa: 10.08.2018
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ABNT
REZENDE, Alexandre Gonçalves de. Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-12122018-111536/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Rezende, A. G. de. (2018). Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-12122018-111536/ -
NLM
Rezende AG de. Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-12122018-111536/ -
Vancouver
Rezende AG de. Obtenção de virus like particles (VLPs) de Mayaro usando diferentes sistemas de expressão [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-12122018-111536/ - Avaliação da expressão gênica em células de mamíferos utilizando o Semliki Forest vírus
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