Desenvolvimento da produção industrial de uma nova vacina Pertussis de células inteiras com baixa reatogenicidade (2018)
- Authors:
- Autor USP: AKAMATSU, MILENA APETITO - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: COQUELUCHE; VACINAS; IMUNIZAÇÃO; GENOMAS; ELISA; WESTERN BLOTTING; BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS; GENÉTICA BACTERIANA; PRODUÇÃO INDUSTRIAL
- Keywords: Bordetella pertussis; Bordetella pertussis; Genoma; Genome; LPS; LPS; Vacina pertussis celular; Whole cell pertussis vaccine
- Language: Português
- Abstract: A coqueluche é uma doença respiratória contagiosa, causada pela bactéria Bordetella pertussis. Tendo um significativo impacto epidemiológico, esta doença sofreu uma expressiva redução após o uso disseminado de vacinas pertussis. Efeitos adversos na imunização com a Vacina de células inteiras Whole cell pertussis (wP), atribuídos a presença de lipopolissacarídeos (LPS), levou ao desenvolvimento da Vacina pertussis acelular (aP). Contudo, a imunização com aP não tem demonstrada a mesma eficiência que a imunização com wP. Diante desse cenário o objetivo deste trabalho é desenvolver o processo de produção industrial de uma nova Vacina Pertussis de células inteiras com reduzida quantidade de LPS e baixa reatogenicidade, a Vacina Pertussis Low (wPlow). Para alcançar o objetivo, foram produzidos em escala industrial 25 lotes de cultivos inativados, concentrados e submetidos à extração de LPS com solvente orgânico. Para extração de LPS foram avaliadas 4 diferentes metodologias: filtração de fluxo tangencial (TFF); filtração de fluxo tangencial com lavagem com solução com solvente orgânico (TFFSW); centrifuga tubular (CT); centrifugação de fluxo contínuo de pratos (CFC). A wPlow produzida em centrifuga de bancada e a wP foram usadas para comparação. O processo de bancada resultou na redução de LPS (método Purpald) em média de 75% do conteúdo de LPS e a redução de 81% da atividade endotóxica (dosagem de LAL). Nos processos industriais, por TFF houve a redução de ≅21% doconteúdo de LPS, porém com aumento de ≅ 52% da atividade endotóxica; por TFFSW houve a redução de 46% do conteúdo de LPS e uma redução endotóxica média de ≅ 24%; por CT ocorreu à redução de ≅ 66% do conteúdo de LPS e de ≅ 73% da atividade endotóxica; com a CFC houve a redução de ≅ 92% do conteúdo de LPS e de ≅ 61% da atividade endotóxica. Os rendimentos de processo foram ≅ 83%, 61%, 37% e 63% respectivamente para os processos de TFF, TFFSW, CT e CFC. Através de microscopia eletrônica, foi possível visualizar a integridade celular após o processamento por CFC, e o principal antígeno vacinal, a toxina pertussis foi detectada na preparação, por western-blot. Quanto à imunogenicidade, anticorpos IgG anti-pertussis foram detectados por ELISA e resultados preliminares não mostraram diferença significativa de redução de colonização pulmonar de B. pertussis em camundongos imunizados com a wPlow ou wP. Diante dos resultados obtidos, podemos concluir que os processos de TFF e TFFSW não foram eficientes na remoção da atividade endotóxica da wPlow, embora tenha ocorrido a redução do LPS. Com relação aos processos utilizando centrífugas industriais, eficientes tanto na remoção do LPS e na redução da atividade endotóxica, houve, contudo, um baixo rendimento no processo com CT. A wPlow produzida por CFC foi imunogênica, indicando a eficácia potencial desta vacina e que a produção em escala industrial é um processo viável. Como parte deste trabalho, acepa vacinal de Bordetella pertussis foi também caracterizada pelo seu sequenciamento genômico completo (genbank número CP010323)
- Imprenta:
- Data da defesa: 13.04.2018
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ABNT
AKAMATSU, Milena Apetito. Desenvolvimento da produção industrial de uma nova vacina Pertussis de células inteiras com baixa reatogenicidade. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-03122018-113431/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Akamatsu, M. A. (2018). Desenvolvimento da produção industrial de uma nova vacina Pertussis de células inteiras com baixa reatogenicidade (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-03122018-113431/ -
NLM
Akamatsu MA. Desenvolvimento da produção industrial de uma nova vacina Pertussis de células inteiras com baixa reatogenicidade [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-03122018-113431/ -
Vancouver
Akamatsu MA. Desenvolvimento da produção industrial de uma nova vacina Pertussis de células inteiras com baixa reatogenicidade [Internet]. 2018 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-03122018-113431/
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