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Ensaio enzimático on-line baseado em enzimas imobilizadas e cromatografia zonal para identificação e caracterização de inibidores da enzima Nucleosídeo Difosfato Quinase B (2018)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: LIMA, JULIANA MARIA DE - FFCLRP
  • Unidades: FFCLRP
  • Sigla do Departamento: 593
  • Subjects: ENZIMAS; INIBIDORES DE ENZIMAS; QUÍMICA
  • Language: Português
  • Abstract: As enzimas desempenham papel fisiológico fundamental nos organismos, seja em condições normais e patológicas, o que as tornam atrativos alvos para intervenções terapêuticas. Pequenas moléculas capazes de inibir enzimas alvos são utilizadas para o tratamento de diversas doenças inflamatórias, câncer, AIDS, entre outras. Contudo, a identificação de pequenas moléculas inibidores ainda é uma etapa limitante no desenvolvimento de fármacos. Nesse contexto, o aprimoramento e novos ensaios robustos e confiáveis para acelerar a descoberta e a caracterização de novos inibidores é de extrema relevância. Nesta tese apresentamos o desenvolvimento de apropriados métodos para a quantificação direta da atividade das enzimas alvos Nucleosídeo Difosfato Quinase B (NDPKb), humana (NME2) e de Leishmania major (LmNDPKb), livres em solução ou imobilizadas em colunas captares (ICER). A separação dos produtos e substratos da reação foi realizada por cromatografia de par iônico, que possibilitou a quantificação direta da atividade enzimática da NDPKb livre em solução, método off-line. Já para a quantificação da atividade das enzimas imobilizadas foi elaborado um método on-line, no qual a reação enzimática do ICER foi transferida à coluna analítica, permitindo a separação e quantificação da atividade de fosfotransferência. Utilizando esses métodos foi possível determinar o pH ótimo e os parâmetros cinéticos das enzimas livres e imobilizadas. Inibidores de NDPKb de diferentes potências e mecanismos de ação foram utilizados para modulação do sistema ICER-LC-UV como ensaio de triagem de inibidores. O (-)-Epicatequina galato (ECG) foi utilizado como prova de conceito, para validar a aplicação do método on-line na identificação e caracterização de inibidores para as enzimas alvo NME2 e LmNDPKb. Em suma, a quantificação direta associada ao uso de enzimasimobilizadas representa um grande avanço aos métodos consolidados para o monitoramento da atividade enzimática e triagem de inibidores das enzimas alvo
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 11.05.2018

  • How to cite
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    • ABNT

      LIMA, Juliana Maria de; CARDOSO, Carmen Lúcia. Ensaio enzimático on-line baseado em enzimas imobilizadas e cromatografia zonal para identificação e caracterização de inibidores da enzima Nucleosídeo Difosfato Quinase B. 2018.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018.
    • APA

      Lima, J. M. de, & Cardoso, C. L. (2018). Ensaio enzimático on-line baseado em enzimas imobilizadas e cromatografia zonal para identificação e caracterização de inibidores da enzima Nucleosídeo Difosfato Quinase B. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Lima JM de, Cardoso CL. Ensaio enzimático on-line baseado em enzimas imobilizadas e cromatografia zonal para identificação e caracterização de inibidores da enzima Nucleosídeo Difosfato Quinase B. 2018 ;
    • Vancouver

      Lima JM de, Cardoso CL. Ensaio enzimático on-line baseado em enzimas imobilizadas e cromatografia zonal para identificação e caracterização de inibidores da enzima Nucleosídeo Difosfato Quinase B. 2018 ;


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