Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19 (2018)
- Authors:
- Autor USP: MOÇO, PABLO DIEGO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: IMUNOTERAPIA; ANTÍGENOS; LINFÓCITOS; CÉLULAS-TRONCO; CÉLULAS
- Keywords: Immunotherapy; Concentration; Chimeric antigen receptor; CD19; CAR-T cells; Lentiviral vectors; Imunoterapia; Concentração; Receptor quimérico de antígeno; Linfócitos TCAR; Vetores lentivirais
- Language: Português
- Abstract: A imunoterapia utilizando linfócitos T modificados com receptor quimérico de antígenos (CAR) tem se mostrado eficaz no tratamento de leucemia e linfomas resistentes à quimioterapia. A proteína CD19 é considerada um alvo ideal porque é expressa na maioria dos tumores de linfócitos B e linfócitos B normais, mas não em outras células. Estudos clínicos recentes mostraram excelentes respostas de linfócitos T-CAR em uma variedade de tumores de células B. Os vetores lentivirais são o método mais comumente utilizado para modificação genética em ensaios clínicos. Este estudo teve como objetivo desenvolver uma plataforma eficiente para a produção de lentivírus e testar a funcionalidade desses vetores para que possam ser usados para modificar geneticamente linfócitos T. A transfecção transiente de céulas HEK293T com plasmídeos na proporção de 3:1:1:1 (transgene:gag-pol:VSV-G:rev) utilizando lipossomos catiônicos e 5 mM de butirato de sódio resultou nos títulos virais mais elevados. Isso representa um aumento de 17 vezes no título viral da transfecção com polietilenoimina (PEI). Três métodos para concentracao lentiviral foram utilzados nesse trabalho, ultracentrifugação, filtração tangencial e ultrafiltração. A ultrafiltração sobre membrana com corte de peso molecular (MWCO) de 100 kDa resultou na maior taxa de recuperação de partículas virais viáveis, aproximadamente 82%. As partículas virais produzidas por este processo demonstraram ser funcionais para a transdução de linfócitos T.Além disso, o receptor quimérico (CAR) se mostrou específico contra o antígeno CD19 de células B, resultando na ativação dos linfócitos T-CAR e gerando citotoxicidade contra células CD19+ in vitro. Houve uma redução de aproximadamente 87% das células alvo, quando analisado por citometria de fluxo e uma citotoxicidade média de 50% foi observada por ensaios colorimétricos
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 23.07.2018
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ABNT
MOÇO, Pablo Diego. Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19. 2018. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17153/tde-13092018-153935/. Acesso em: 27 dez. 2025. -
APA
Moço, P. D. (2018). Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19 (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17153/tde-13092018-153935/ -
NLM
Moço PD. Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19 [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17153/tde-13092018-153935/ -
Vancouver
Moço PD. Estabelecimento de uma plataforma para produção de vetores lentivirais para modificação de linfócitos T com CAR anti-CD19 [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17153/tde-13092018-153935/
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