Exportar registro bibliográfico

Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica (2018)

  • Authors:
  • Autor USP: BOMFIM, ALINE DE SOUSA - FCFRP
  • Unidade: FCFRP
  • Sigla do Departamento: 602
  • Subjects: HEMOFILIA; COAGULAÇÃO; BIOCIÊNCIAS
  • Keywords: Atividade coagulante; Variantes de FIX; FIX recombinante humano; Hemofilia B; Clotting activity; Recombinant human FIX; FIX variants; Hemophilia B
  • Language: Português
  • Abstract: O Fator IX (FIX) da coagulação sanguínea é uma proteína dependente de vitamina K de grande valor farmacêutico no tratamento da hemofilia B, o qual é baseado na administração de FIX derivado de plasma humano ou FIX recombinante. A terapia baseada nestas abordagens apresenta limitações como os altos custos e a baixa disponibilidade para a população de hemofílicos. O FIX é uma proteína complexa com grande variedade de modificações pós-traducionais e, por isso, apresenta baixa atividade específica e produtividade. A produção de um FIX recombinante com aumento na sua atividade coagulante pode contribuir para terapias de reposição e gênica mais eficazes nas quais quantidades menores das moléculas cataliticamente melhoradas serão necessárias para se obter os benefícios terapêuticos do FIX. Essa infusão diminuída poderá reduzir ou eliminar a geração de inibidores de FIX, minimizando os efeitos colaterais e reduzindo os custos do tratamento, sendo um dos desafios atuais no tratamento da hemofilia B. Nesse contexto, a engenharia genética tem se tornado uma ferramenta importante na modificação de proteínas de interesse farmacêutico visando a melhora das suas propriedades bioquímicas e biofísicas. Este trabalho teve como objetivo desenvolver novas variantes de FIX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica. Para isso, fizemos um estudo detalhado da estrutura da proteína FIX e geramos três variantes FIX-YKALW, FIX-ALL e FIX-LLW, utilizando a técnica de mutagênese sítiodirigida. Essas variantes foram expressas em células humanas SK-Hep-1 tratadas com vitamina K e as proteínas foram caracterizadas in vitro e in vivo. A quantidade de FIX total secretada no sobrenadante celular foi similar entre as variantes FIX-YKALW e FIX-LLW (3,2 ?g/mL), enquanto FIX-ALL apresentou a menor expressão (1,8 ?g/mL), quantidades 2-3 vezes menores que de FIX controle (FIX-WT). Entretanto, a atividade biológica das variantes foi, em média, 6,2 vezes maior que FIX-WT, com atividade específica 11 vezes maior para FIX-YKALW e FIX-LLW e 24 vezes maior para FIX-ALL. FIX-YKALW apresentou a melhor geração de trombina in vitro dentre as variantes e destacou-se na avaliação da eficiência hemostática em camundongos hemofílicos B, na qual uma dose 5 vezes menor que a recomendada de FIX foi suficiente para promover uma resposta pró-coagulante. Neste trabalho foram desenvolvidas 3 novas variantes de FIX recombinante humano com maior atividade específica que o fator disponível no Sistema Único de Sáude. O FIX-ALL apresentou-se como a proteína mais potente in vitro descrita até o momento e FIX-YKALW como a mais promissora, dentre as mutantes desenvolvidas, na proteção hemostática in vivo. Estudos complementares são necessários para transpor a barreira da pesquisa para a utilização desses novos fatores de coagulação no tratamento da hemofilia B. Entretanto, esse trabalho apresenta novas proteínas com potencial de serem usadas na combinação com a terapia gênica bem como na terapia de reposição
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.04.2018
  • Acesso à fonte
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      BOMFIM, Aline de Sousa; RUSSO, Eliza Maria Águeda; CASTRO, Virgínia Picanço e. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica. 2018.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/ >.
    • APA

      Bomfim, A. de S., Russo, E. M. Á., & Castro, V. P. e. (2018). Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/
    • NLM

      Bomfim A de S, Russo EMÁ, Castro VP e. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica [Internet]. 2018 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/
    • Vancouver

      Bomfim A de S, Russo EMÁ, Castro VP e. Geração de novas variantes de fator IX recombinante humano com aumento da sua atividade biológica [Internet]. 2018 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-23052018-091516/


Digital Library of Intellectual Production of Universidade de São Paulo     2012 - 2020