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Caracterização de proteínas secretadas por Leptospira spp. e sua possível aplicação no diagnóstico da leptospirose (2017)

  • Authors:
  • Autor USP: MATOS, LARISSA DO RêGO BARROS - FMVZ
  • Unidade: FMVZ
  • Sigla do Departamento: VPS
  • Subjects: LEPTOSPIROSE; LIPASE; LEPTOSPIROSE; PROTEÍNAS
  • Keywords: Secreted proteins; Sistemas de expressão heteróloga; Brevibacillus; Brevibacillus; Heterologous expression systems; Leptospirosis; Lipase; Proteínas secretadas
  • Language: Português
  • Abstract: A leptospirose é causada por bactérias do gênero Leptospira e constitui um problema de saúde pública mundial, por acometer humanos e animais. Sua patogênese ainda é pouco esclarecida, especialmente quanto aos processos de invasão, adesão e colonização dos hospedeiros. Recentemente, proteínas secretadas por leptospiras foram identificadas por proteômica e análises in silico, algumas das quais apresentam possível envolvimento no desenvolvimento de quadros hemorrágicos, bem como podem ser possíveis antígenos para diagnóstico. Sendo assim, o presente trabalho propôs a clonagem em vetor de expressão heteróloga bacteriano das sequências codificantes das proteínas Sph2, LipA, ColA e LipL32 de L. interrogans sorovar Copenhageni, caracterização funcional das proteínas recombinantes purificadas e estudo do seu potencial uso no diagnóstico para a leptospirose. Essas proteínas foram escolhidas por possivelmente estarem envolvidas na patogênese de leptospiras. Para tanto, as sequências correspondentes aos genes das proteínas foram clonadas nos vetores de expressão em Brevibacillus choshinensis e Escherichia coli. A produção de soro policlonal e técnicas de ELISA, western-blotting e imuno-histoquímica foram realizadas para avaliar a funcionalidade das proteínas recombinantes purificadas. Também foram realizados testes de comprovação e caracterização da atividade enzimática para proteína LipA, que se apresenta como uma provável lipase na análise in silico. Os resultados obtidos mostraramque o sistema de expressão em Brevibacillus foi eficiente na expressão das proteínas, porém com baixo rendimento na purificação das proteínas Sph2, ColA e LipA. A proteína recombinante LipL32 purificada não apresentou diferença na sua atividade antigênica, em relação aos dois sistemas de expressão utilizados. Experimentos de Western - blotting demonstraram a presença de proteína LipA em diferentes sorovares patogênicos de Leptospira spp. A proteína LipA apresentou atividade lipásica sobre ésteres graxos de p-nitrofenil, sendo uma provável lipase euritérmica. Os dados obtidos com a análise de imuno-histoquímica sugerem que esta proteína possa participar dos eventos que levam a lesões na membrana celular no tecido hepático. Resultados de ELISA com soro de pacientes mostraram que as proteínas ColA e Sph2 são potenciais antígenos para diagnóstico da leptospirose. Apenas a proteína ColA apresentou ação hemorrágica na pele de camundongos. Estes resultados indicam que as proteínas LipA, ColA e Sph2 podem estar envolvidas em mecanismos patogênicos na leptospirose
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 21.08.2017
  • Acesso à fonte
    How to cite
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    • ABNT

      MATOS, Larissa do Rêgo Barros; ANIZ, Patricia Antonia Estima Abreu de. Caracterização de proteínas secretadas por Leptospira spp. e sua possível aplicação no diagnóstico da leptospirose. 2017.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-09042018-095628/ >.
    • APA

      Matos, L. do R. B., & Aniz, P. A. E. A. de. (2017). Caracterização de proteínas secretadas por Leptospira spp. e sua possível aplicação no diagnóstico da leptospirose. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-09042018-095628/
    • NLM

      Matos L do RB, Aniz PAEA de. Caracterização de proteínas secretadas por Leptospira spp. e sua possível aplicação no diagnóstico da leptospirose [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-09042018-095628/
    • Vancouver

      Matos L do RB, Aniz PAEA de. Caracterização de proteínas secretadas por Leptospira spp. e sua possível aplicação no diagnóstico da leptospirose [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-09042018-095628/

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