A identificação de parceiros de interação de NtCDKG;2 revela suas possíveis funções biológicas em Nicotiana tabacum (2016)
- Authors:
- Autor USP: FERREIRA, PEDRO BOSCARIOL - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: GENÉTICA; PROTEÍNAS; CICLO CELULAR; BIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: As flores são as estruturas reprodutivas do grupo vegetal Magnoliophyta, cuja ampla diversidade de espécies acredita-se seja devido aos novos mecanismos de polinização e dispersão de sementes proporcionados pela presença dessas estruturas. O estudo de genes preferencialmente ou exclusivamente expressos nos órgãos florais permite elucidar os mecanismos que regulam o desenvolvimento carreto desses, o que é essencial para a reprodução da planta. Um desses genes, SCI1, codifica um inibidor do ciclo celular preferencialmente expresso no estigma e estilete, que influencia no tamanho final do pistilo através do controle da proliferação celular em Nicotiana tabacum. Na busca por parceiros de interação de SCI1 por pulldown, foi encontrada uma putativa proteína quinase, homóloga da CDKG;2 de Arabidopsis thaliana, a qual foi relacionada com o controle do florescimento, provavelmente através de sua associação com a Ciclina L. Essa ciclina tem dois domínios de ciclinas e também um domínio RS, encontrado em proteínas que participam do processamento de mRNAs. A interação de SCI1 e NtCDKG;2 já foi confirmada por Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) e SCI1 também interage com NtCiclina L, homóloga à Ciclina L de A. thaliana. Para elucidar os processos em que NtCDKG;2 atua, e como eles se relacionam com o controle da proliferação celular exercido por SCI1, foi iniciado um screening por duplo-híbrido em leveduras (Y2H), utilizando NtCDKG;2 como isca e uma biblioteca de cDNAs de estigmas e estiletes como presas. O presente trabalho teve como objetivos: dar continuidade a identificação de candidatos encontrados no screening de Y2H de NtCDKG;2; confirmar a interação de putativos parceiros de NtCDKG;2 através de Y2H e BiFC; analisar a sequência de aminoácidos de NtCDKG;2 em comparação com outras CDKs. Foram confirmados, por Y2H, os seguintes parceiros de interaçãode NtCDKG;2: NtHB22, NtTCP14 e NtWRKY32 (fatores de transcrição); as subunidades da RNAPII NtRPB7 e NtRPB11; NtU2A' (parte do spliceossomo) e NtLARP6a (chaperona de RNAs); as subunidades NtPP2A-4 e NtPP2A-A2 da fosfatase PP2A, NtCDC25-like, NtFBL17 e NtUCNL (todas envolvidas no controle do ciclo celular); e as proteínas NtBRG3 e NtFRL3 (envolvidas no controle do florescimento). A técnica de Y2H também permitiu confirmar a interação de NtCDKG;2 com NtCiclina L e NtDEAD-BOX35, ambas parceiras de SCI1. Os experimentas de BiFC confirmaram a interação entre NtCDKG;2 e NtCiclina L, NtCDKF;1 (identificada em trabalho anterior do nosso grupo), NtU2A' e NtDEAD-BOX35. Adicionalmente, foi confirmada, por Y2H e BiFC, a interação entre duas NtCDKG;2, sugerindo um mecanismo de auto-fosforilação, o que é observado em CDKF;1. A interação de NtCDKG;2 com o CTD da RNAPII também foi positiva por Y2H, o que corrobora a hipótese do envolvimento desta quinase na transcrição e processamento de RNAs. Adicionalmente, foi verificado que NtCDKG;2-GFP co-localiza com NtCDKF;1-mCherry e NtRS2Z33-mCherry. As análises comparativas in silico da sequência proteica de NtCDKG;2 com outras CDKs mostraram que: não existem homólogas de AtCDKG;1 nas solanáceas; no gênero Nicotiana existem dois tipos de CDKG;2; as diferenças entre essas CDKG;2 estão em sua porção amino-terminal, principalmente na quantidade de motivos RS; que NtCDKG;2 é similar à CDK11 de H. sapiens, proteína com papel descrito no splicing. Em conjunto, esses resultados fornecem evidências da participação de NtCDKG;2 no processamento de RNAs e no ciclo celular, provavelmente em um mecanismo que envolve sua inibição por SCI1. Além disso, algumas parceiras de interação identificadas estão relacionadas com o controle do florescimento, e podem explicar os mecanismos pelos quais CDKG;2 afeta esse processo biológico
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 17.06.2016
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ABNT
FERREIRA, Pedro Boscariol. A identificação de parceiros de interação de NtCDKG;2 revela suas possíveis funções biológicas em Nicotiana tabacum. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Ferreira, P. B. (2016). A identificação de parceiros de interação de NtCDKG;2 revela suas possíveis funções biológicas em Nicotiana tabacum (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Ferreira PB. A identificação de parceiros de interação de NtCDKG;2 revela suas possíveis funções biológicas em Nicotiana tabacum. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ] -
Vancouver
Ferreira PB. A identificação de parceiros de interação de NtCDKG;2 revela suas possíveis funções biológicas em Nicotiana tabacum. 2016 ;[citado 2025 dez. 28 ] - SCI1 e NtCDKG;2 atuam no ciclo celular, no processamento de RNAs e no desenvolvimento floral em Nicotiana tabacum
- The potential of CRISPR/Cas technology to enhance crop performance on adverse soil conditions
- Efficient genetic transformation of the potential bioreactor duckweed Lemna japonica using the UBQ: Ruby reporter construct
- Silencing of a pectin acetylesterase (PAE) gene highly expressed in tobacco pistils negatively affects pollen tube growth
- The Nicotiana tabacum CDKG;2 is involved in flowering, transcription, splicing and cell cycle control
- Modulating the activity of the APC/Cr regulator SISAMBA improves the sugar and antioxidant content of tomato fruits
- SCI1 expression in Nicotiana tabacum floral meristems is regulated by the transcription factors WUSCHEL, aintegumenta-like6 and agamous
- SCI1, a flower regulator of cell proliferation, and its partners NtCDKG2 and NtRH35 interact with the splicing machinery
- Unveiling the movement of RanBP1 during the cell cycle and its interaction with a Cyclin-Dependent Kinase (CDK) in plants
- A novel plant DEAD-box RNA helicase associated with transcription factors
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