Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes (2018)
- Authors:
- Autor USP: VILELA, ADRIANA FERREIRA LOPES - FFCLRP
- Unidade: FFCLRP
- Sigla do Departamento: 593
- Subjects: QUÍMICA; ENZIMAS; TRIAGEM; LIGANTES; DOENÇA DE ALZHEIMER
- Keywords: Acetilcolinesterase; Acetylcholinesterase; Alzheimer's disease; B-secretase; B-secretase1; Co-immobilization of enzyme; Co-imobilização de enzimas; Doença de Alzheimer; Screening inhibitors; Triagem de ligantes
- Language: Português
- Abstract: As enzimas, Acetilcolinesterase (AChE) e β-secretase1 (BACE1), são alvos de interesse nos estudos de desenvolvimento de fármacos para a Doença de Alzheimer, pois estão envolvidas na etiologia e progresso da doença. Assim, considerando o interesse por inibidores destas enzimas, que atuem na presença de ambas, este trabalho consistiu no desenvolvimento de metodologias com as enzimas AChE e BACE1 imobilizadas para serem aplicadas na identificação e caracterização de ligantes. Primeiramente, estudos individuais foram desenvolvidos através de distintas abordagens de imobilização, o que contribuiu para a obtenção e seleção de um método em comum, com as enzimas ativas e estáveis. Duas matrizes como suportes foram utilizadas sendo a agarose e o capilar de sílica fundida. Na parte I do texto, descrito a imobilização covalente da BACE1 via amino-glutaraldeído em capilar de sílica fundida, formando o ICER-BACE1 (Immobilized Capillary Enzyme Reactor). O sistema foi monitorado online por espectrometria de massa (MS) e caracterizado com o substrato JMV2236. O ICER-BACE1 foi empregado para a determinação dos parâmetros cinéticos para a enzima imobilizada como variações de; pH, temperatura, concentração de substrato e inibidor padrão (inibidor de β-secretase), bem como, aplicação na triagem de uma coleção de oito compostos sintéticos com identificação de dois compostos com atividade inibitória e caracterização destes. O ICER-BACE1 mostrou estabilidade e atividade durante todos os estudos demonstrando eficiência e reprodutibilidade. Na parte II, aborda a imobilização da AChE electrophorus electricus (AChEee) em diferentes suportes de agarose heterofuncionais, os derivados imobilizados foram estudados usando o pnitrofenol como substrato. A preparação ótima conservou 65% de sua atividade catalítica inicial resultando em uma enzima 250 vezes mais estável que aAChE solúvel. Esta preparação foi validada empregando tacrina como inibidor padrão, e os parâmetros cinéticos de inibição, potência inibitória (IC50) e constante de inibição (Ki), e também a constante de dissociação (KD) para o equilíbrio AChE-tacrina foram determinados. O derivado imobilizado ótimo mostrou ser uma ferramenta interessante para uma triagem rápida na identificação de propriedades inibitórias de novos compostos com atividade inibitória. A BACE1 também foi imobilizada utilizando os mesmos derivados de agarose preparados e o melhor método de imobilização obtido foi selecionado para a co-imobilização da BACE1. Na parte III, consta a descrição da co-imobilizaçao de ambas as enzimas com base nos estudos anteriores, tanto para agarose quanto em capilar de sílica fundida, denominados métodos offline e online. Em ambos os métodos a imobilização foi eficiente refletindo na atividade de cada enzima nos sistemas co-imobilizados. Assim, os métodos para triagem desenvolvidos neste trabalho são inéditos para ambas as enzimas, enfatizando a co-imobilização como um modelo de triagem em um ambiente especifico que corrobora com processos celulares
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2018
- Data da defesa: 23.03.2018
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ABNT
VILELA, Adriana Ferreira Lopes. Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes. 2018. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06072018-110632/. Acesso em: 28 dez. 2025. -
APA
Vilela, A. F. L. (2018). Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06072018-110632/ -
NLM
Vilela AFL. Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06072018-110632/ -
Vancouver
Vilela AFL. Co-imobilização das enzimas acetilcolinesterase e β-secretase1: estudo de condições para triagem de ligantes [Internet]. 2018 ;[citado 2025 dez. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-06072018-110632/ - Imobilização da enzima butirilcolinesterase e o desenvolvimento de métodos de triagem para inibidores seletivos
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