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Mecanismos intracelulares induzidos por leucotrienos durante a diferenciação osteogênica (2017)

  • Authors:
  • Autor USP: OLIVEIRA, FLÁVIA AMADEU DE - FOB
  • Unidade: FOB
  • Sigla do Departamento: BAE
  • Subjects: MECANISMOS; CÉLULAS; LEUCOTRIENOS; OSTEOGÊNESE; LIPOXIGENASE; REABSORÇÃO ÓSSEA DE ANIMAL; CAMUNDONGOS; MICROTOMOGRAFIA
  • Language: Português
  • Abstract: Os leucotrienos (LTs) são mediadores inflamatórios derivados da via 5-lipoxigenase (5-LO), com contribuição relevante na reabsorção óssea. Neste estudo investigamos o papel dos LTs na diferenciação osteogênica e o seu impacto na osteoclatogênese. Assim, foi avaliado o perfil ósseo dos camundongos 129/Sv (WT) e 5-LO Knockout (5-LO KO) por meio de microtomografia computadorizada, evidenciando maior densidade óssea vertebral e trabéculas mais espessas em machos 5-LO KO. Após isso, osteoblastos primários (OBL) foram isolados e cultivados para determinar a atividade de fosfatase alcalina (ALP) e o potencial de mineralização. Resultados mostraram que OBL KO possui maior atividade de ALP e mineralização, em todos os períodos quando comparados com WT. Em adição, o tratamento com os LTs B4 e D4 inibiu a deposição de cálcio. Os inibidores da síntese de LTs e os antagonistas do BLT1/2 foram efetivos em recuperar a formação dos nódulos mineralizados. A cinética do Alox5 apresentou um aumento da expressão nos períodos de maior diferenciação celular em OBL WT. Além disso, a expressão de OCN, MMPs 2 e 9 e RANKL foram aumentadas em células 5-LO KO em quase todos os períodos avaliados. Em geral, o estímulo com LTs, seus inibidores e antagonistas diminuiu a expressão de Sp7, Col1a1, Opg e MMP-9 e aumentou RANKL em células KO. A sinalização por meio de segundos mensageiros também foi avaliada. Células 5-LO KO apresentam menor concentração de cálcio intracelular (Ca2+i) em relação ao WT. No período de 14 dias, o estímulo com LTD4 inibiu a liberação Ca2+i independente da linhagem, em relação ao controle. Os níveis de cAMP foram menores em OBL 5- LO KO, em todos os grupos tratados ou controle. LTD4 diminuiu a concentração de cAMP, mas não LTB4, em OBL 5-LO KO.O estudo também quantificou a produção de LTB4 e outros eicosanoides em osteoblastos mostrando a sua capacidade de síntese. A análise proteômica revelou 89 proteínas com expressão diminuída em OBL 5-LO KO, de um total de 154, sendo a maioria relacionada ao citoesqueleto e ao metabolismo energético. Também foram identificadas 59 proteínas exclusivas em OBL 5-LO KO e 06 unicamente expressas em células WT, revelando as diferenças intrínsecas de cada animal. O perfil osteoclastogênico de camundongos WT vs. 5-LO KO mostrou diferenças significativas na análise fenotípica, TRAP e na expressão gênica de células derivadas da linhagem monocítica-macrofágica. Após o estímulo com M-CSF e RANKL, as células WT apresentaram osteoclastos gigantes multinucleados, porém, células 5-LO KO apresentaram uma população de células com formas e tamanhos variáveis, e menor grau de maturação. Em adição, os LTsexógenos não modularam a atividade da TRAP. O meio condicionado proveniente dos OBL WT e KO, retardaram o processo de formação dos osteoclastos. A análise da expressão gênica em osteoclastos mostrou diminuição da expressão de Alox5, Il- 1b, Il-6 e TNFa em células 5-LO KO. BLT1/2, CysLt1 e os marcadores da diferenciação Acp5, Ctsk e Nfact1 não apresentaram diferenças entre os animais. Em adição, o LTB4 diminuiu a expressão do Alox5 e a Il-1b foi aumentada em osteoclastos WT. Assim, os resultados demonstram que os LTs são capazes de modular o metabolismo ósseo, e a ausência do gene da 5-LO está relacionada ao maior perfil osteogênico.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 26.01.2018
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    • ABNT

      OLIVEIRA, Flávia Amadeu de; OLIVEIRA, Rodrigo Cardoso de. Mecanismos intracelulares induzidos por leucotrienos durante a diferenciação osteogênica. 2017.Universidade de São Paulo, Bauru, 2017. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-24052018-182709/publico/FlaviaAmadeudeOliveira_Rev.pdf >.
    • APA

      Oliveira, F. A. de, & Oliveira, R. C. de. (2017). Mecanismos intracelulares induzidos por leucotrienos durante a diferenciação osteogênica. Universidade de São Paulo, Bauru. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-24052018-182709/publico/FlaviaAmadeudeOliveira_Rev.pdf
    • NLM

      Oliveira FA de, Oliveira RC de. Mecanismos intracelulares induzidos por leucotrienos durante a diferenciação osteogênica [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-24052018-182709/publico/FlaviaAmadeudeOliveira_Rev.pdf
    • Vancouver

      Oliveira FA de, Oliveira RC de. Mecanismos intracelulares induzidos por leucotrienos durante a diferenciação osteogênica [Internet]. 2017 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-24052018-182709/publico/FlaviaAmadeudeOliveira_Rev.pdf


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