Fatores de transcrição da família MarR e resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum (2017)
- Authors:
- Autor USP: BARROSO, KELLY CRISTINA MARTINS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: FATORES DE TRANSCRIÇÃO; ANTIBIÓTICOS; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
- Keywords: Antibiotic resistance; Bombas de efluxo; Chromobacterium violaceum; Chromobacterium violaceum; Efflux pumps; EmrR regulator; Família MarR; Fatores de transcrição; Regulador EmrR; Resistência a antibióticos; Transcription factors; MarR family
- Language: Português
- Abstract: A resistência aos antibióticos é um problema de saúde pública global com sérias consequências para o tratamento de várias infecções bacterianas. Os fatores de transcrição da família MarR têm sido descritos controlando resistência a antibióticos e vários outros processos em bactérias. Neste trabalho, estudamos mecanismos de resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum, uma bactéria Gram-negativa ambiental que pode atuar como um patógeno oportunista em humanos. A estratégia envolveu a varredura de um painel de treze linhagens mutantes de fatores de transcrição da família MarR de C. violaceum disponíveis, por testes de susceptibilidade a 24 antibióticos. Estes ensaios revelaram que apenas o mutante ΔemrR apresentou resistência aumentada ao antibiótico ácido nalidíxico em relação à linhagem selvagem. Esta resistência aumentada do mutante ΔemrR ao ácido nalidíxico foi revertida em uma linhagem complementada deste mutante, conforme verificado por ensaios de viabilidade, ensaios de difusão em disco e concentração inibitória mínima (MIC). O fenótipo de diminuída produção de violaceína deste mutante, observado em meio líquido, também foi complementado. Além disso, foi realizado o isolamento de mutantes espontâneos de C. violaceum resistentes a ácido nalidíxico com mutação pontual em emrR. Os ensaios de microarranjo de DNA mostraram que EmrR reprime algumas dezenas de genes, incluindo o operon emrCAB, o qual codifica a bomba de efluxo EmrCAB. Os ensaios de Northern blot confirmaram que o EmrR reprime o operon emrCAB, e que a expressão desta bomba é induzida por salicilato, mas não outros compostos, como ácido nalidíxico ou brometo de etídeo. Os ensaios de alteração de mobilidade eletroforética (EMSA) mostraram que a proteína EmrR purificada se liga diretamente às regiões promotores de emrR, emrCAB e vários outros genes do regulon EmrR, paraexercer uma regulação negativa direta sobre esses genes. Um mutante nulo ΔemrCAB foi obtido, mas a ausência desta bomba de efluxo não tornou C. violaceum mais susceptível ao ácido nalidíxico, sugerindo que ela é importante somente em condições nas quais é induzida. Estas condições indutoras talvez incluam estresse oxidativo, uma vez que enzimas antioxidantes são parte do regulon de EmrR e a proteína EmrR formou dímeros covalentes na presença de agentes oxidantes in vitro. Portanto, nossos dados revelam que mutações pontuais ou moléculas como salicilato abalem a atividade repressora do fator de transcrição EmrR sobre o operon emrCAB, levando a superexpressão da bomba de efluxo EmrCAB e aumentando a resistência ao ácido nalidíxico em C. violaceum
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2017
- Data da defesa: 09.11.2017
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ABNT
BARROSO, Kelly Cristina Martins. Fatores de transcrição da família MarR e resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum. 2017. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-18042018-111802/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Barroso, K. C. M. (2017). Fatores de transcrição da família MarR e resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-18042018-111802/ -
NLM
Barroso KCM. Fatores de transcrição da família MarR e resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum [Internet]. 2017 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-18042018-111802/ -
Vancouver
Barroso KCM. Fatores de transcrição da família MarR e resistência a antibióticos em Chromobacterium violaceum [Internet]. 2017 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-18042018-111802/
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