Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos (2017)
- Authors:
- Autor USP: ZEVALLOS, KARLA ALEJANDRA VIZCARRA - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: CROMOSSOMO X; CROMATINA; REGULAÇÃO GÊNICA; GENES; EPIGÊNESE GENÉTICA
- Keywords: Cromossomo X; Functional Genomic Screening; Genic regulation; Reativação do cromossomo X; Regulação gênica; shRNAs; Triagem funcional genômica; X chromosome; X chromosome reactivation. shRNAs
- Language: Português
- Abstract: A inativação do cromossomo X (ICX) em fêmeas é um exemplo de regulação epigenética. O silenciamento de um dos cromossomos X leva à formação estável da heterocromatina facultativa através da aquisição de múltiplas modificações na cromatina que são mantidas nas subsequentes divisões celulares. Atualmente, algumas características epigenéticas associadas à manutenção da ICX têm sido descritas, contudo os mecanismos de ação e a identidade dos diferentes fatores envolvidos na manutenção da ICX ainda são desconhecidos ou pouco compreendidos. Nosso laboratório realizou uma triagem funcional genômica por bibliotecas de shRNAs (short harpin RNAs) para encontrar genes envolvidos na manutenção da ICX em humanos. A partir deste estudo foram identificados 20 novos genes candidatos a estarem envolvidos na manutenção da ICX. Assim, o objetivo deste trabalho foi validar o grau de envolvimento de dois destes genes candidatos (H3F3B e ASF1A) no processo de controle epigenético do cromossomo X. Para isto, foi realizado o silenciamento dos genes candidatos através da utilização de partículas lentivirais portando shRNAs específicos em fibroblastos primários femininos heterozigotos para uma mutação no gene HPRT e com desvio total de ICX, onde o único alelo normal do gene HPRT está no Xi. A reativação do Xi nestas células foi avaliada por cultivo das mesmas em meio HAT, que seleciona células HPRT+. Só sobreviveram os fibroblastos que foram silenciados para o gene H3F3B. Nestes, as célulastransduzidas com o shH3F3B.2 expressam o alelo selvagem do gene, presente no Xi, além do gene mutante. Ensaios de RNA-FISH e trimetilação de histonas foram feitos nessas células para avaliar a perda das marcas de cromatina inativa. Foi observada uma perda da nuvem de XIST nas células transduzidas com o shH3F3B.2 e selecionadas em HAT em passagens altas. Por último, análises de expressão alelo-específica de genes ligados ao X comprovaram que dois genes que são submetidos à ICX apresentaram expressão do alelo inativado (FLNA e FHL1). Porém, também foi observada uma mudança no padrão de expressão alelo-específica em genes autossômicos. Finalmente, as análises de expressão geral do cromossomo X mostraram que as células transduzidas com o shH3F3B.2 e selecionada em HAT tinham uma expressão gênica aumentada em relação ao controle. Em conclusão, nossos resultados sugerem uma descondensação da cromatina no cromossomo Xi e portanto um provável envolvimento do gene H3F3B na manutenção da ICX
- Imprenta:
- Data da defesa: 12.07.2017
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ABNT
ZEVALLOS, Karla Alejandra Vizcarra. Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos. 2017. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24112017-145313/. Acesso em: 28 set. 2024. -
APA
Zevallos, K. A. V. (2017). Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24112017-145313/ -
NLM
Zevallos KAV. Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos [Internet]. 2017 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24112017-145313/ -
Vancouver
Zevallos KAV. Análise da função de genes candidatos à manutenção da inativação do cromossomo X em humanos [Internet]. 2017 ;[citado 2024 set. 28 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24112017-145313/
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