Cadeia leve de dineina-2: localização subcelular, dinâmica e influência na ciliogênese, via de Hedgehog e crescimento tumoral (2016)
- Authors:
- Autor USP: SILVA JÚNIOR, RUI MILTON PATRÍCIO DA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR; MELANOMA; MIOSINA
- Language: Português
- Abstract: As cadeias leves de dineina (DLC1/DYNLL1/LC8a e DLC2/DYNLL2/LC8b) são pequenas proteínas altamente conservadas entre os eucariotos e compartilham 93% de identidade na sequência de aminoácidos. Inicialmente identificadas como subunidades de dineina e miosina Va, participam em vários processos celulares como apoptose, transporte nuclear, progressão tumoral e ciliogênese. A demonstração de que dimeros de DLC apresentam dois sitias de ligação simétricos para seus alvos, levou à suposição de que elas funcionariam como proteínas adaptadoras de cargo. Evidências recentes de que dimeros de DLC induzem modificações estruturais de outros alvos, além de motores moleculares, favorecem a noção de que elas possam agir como "hub", capaz de interagir com diversificadas proteínas com domínios de a-hélice-dupla para estabilizar, ativar ou nuclear complexos proteicos. Neste estudo, investigamos a localização subcelular e a dinamica da proteína DLC2, revelada por uma etiqueta de proteína fluorescente verde (EGFP), em células tumorais. Estudamos também os efeitos da superexpressão de EGFP-DLC2 no crescimento tumoral e fenótipos gerados pelo silenciamento do gene DYNLL2. Mostramos que EGFPDLC2 apresenta distribuição nuclear e citoplasmática e se comporta como uma proteína dinamica. Durante a divisão celular, localiza-se preferencialmente nos centrossomos e nas fibras do fuso mitótico. Em intérfase, a fluorescência se acumula no centrossomo e acompanha os microtúbulos que partem dele. Partículas e aglomerados fluorescente se concentram em regiões periféricas, próximos a regiões de cantata célula-substrato e em contatos célula-células. Em células vivas, as partículas de EGFP-DLC2 são dinamicas e seu deslocamento e velocidade são dependentes do motor molecular miosina Va e de Ca2+. Utilizando ensaios de FRAP observamos que a fração de EGFP-DLC2 dispersa no citoplasma e no núcleo apresenta um "turnover" rápido, quandocomparado com a fração presente no centrossomo. Por imunofluorescência, mostramos que EGFP-DLC2 colocaliza com miosina Va (total e fosforilada), pFAK, microtúbulos, um marcador especifico de cilios primários, e com E-caderina e ,~-catenina nas regiões de contato célula-célula. O knockdown das DLCs leva a alguns fenótipos aberrantes, como a presença de centrossomos anômalos e a presença de contiguidade do citoplasma entre duas células. Em células de melanoma, a superexpressão de EGFP-DLC2 causa redução no número de células exibindo cilios primários e atenua o crescimento tumoral, in vivo. A superexpressão de EGFP-DLC2 parece causar redução na expressão de DLC1. Além disso, causa o aumento na expressão de vários genes que codificam moléculas da via Hedgehog, incluindo Patch, Smo, Gl2 e Gli3. Concluindo, estes resultados mostram dados inéditos sobre a caracterização da localização celular e dinamica da proteina DLC2 e a coloca em um novo cenário de interações e estruturas celulares. Os dados sugerem também um papel para DLC2 no crescimento tumoral e no balanço da via Hedgehog dependente do cilio primário
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 25.05.2016
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ABNT
SILVA JÚNIOR, Rui Milton Patrício da. Cadeia leve de dineina-2: localização subcelular, dinâmica e influência na ciliogênese, via de Hedgehog e crescimento tumoral. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. . Acesso em: 02 out. 2024. -
APA
Silva Júnior, R. M. P. da. (2016). Cadeia leve de dineina-2: localização subcelular, dinâmica e influência na ciliogênese, via de Hedgehog e crescimento tumoral (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Silva Júnior RMP da. Cadeia leve de dineina-2: localização subcelular, dinâmica e influência na ciliogênese, via de Hedgehog e crescimento tumoral. 2016 ;[citado 2024 out. 02 ] -
Vancouver
Silva Júnior RMP da. Cadeia leve de dineina-2: localização subcelular, dinâmica e influência na ciliogênese, via de Hedgehog e crescimento tumoral. 2016 ;[citado 2024 out. 02 ] - Cannabinoid receptor type 1 (CB1R) expression in limbic brain structures after acute and chronic seizures in a genetic model of epilepsy
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