Desenvolvimento de nanopartículas metal-proteína para a entrega de DNA em estudos de terapia e vacinação gênicas (2017)
- Authors:
- Autor USP: PALMA, MATHEUS MLOT - EP
- Unidade: EP
- Sigla do Departamento: PQI
- Subjects: NANOPARTÍCULAS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; DNA
- Language: Português
- Abstract: Um problema recorrente no desenvolvimento de vacinas de DNA e terapia gênica utilizando vetores não virais é a baixa eficiência de transfecção gênica. Isso ocorre devido às diversas barreiras físicas, enzimáticas e difusionais que o DNA precisa superar para chegar ao núcleo das células. Neste trabalho tem-se por objetivo o desenvolvimento de novos vetores não virais de entrega gênica, formados por DNA plasmidial (pDNA), proteínas (protamina ou T-Rp3) e nanopartículas de ouro (NPAu) na forma de complexos ternários. Para tal, NPAu's foram sintetizadas por redução com citrato de sódio, apresentando diâmetros entre 20,3 e 57,3 nm e potencial zeta entre -69,0 e +43,3 mV, dependendo das condições de síntese, a saber, das quantidades de citrato de sódio adicionadas e da ordem de adição dos reagentes. Em seguida, vetores compostos por pDNA-protamina/T-Rp3-NPAu foram formados, transfectados em células HeLa cultivadas in vitro, e a atividade da enzima repórter luciferase foi medida. Deste modo, a partir de variações em proporção mássica e tamanho de nanopartículas, foi possível obter complexos utilizando protamina e ouro com uma eficiência de transfecção 33 vezes melhor do que transfecções utilizando apenas protamina. Por outro lado, complexos contendo T-Rp3 e ouro se mostraram ainda mais eficazes na entrega, apresentando níveis de transfecção próximos ao do reagente comercial Lipofectamina. Ensaios de transfecção utilizando a droga nocodazol indicaram a importância dos microtúbulos no mecanismo de entrega gênica, e ensaios com a droga cloroquina evidenciaram que as nanopartículas de ouro atuam de maneira diferenciada no escape endossomal dos vetores não virais utilizados. Visando relacionar característicasfísico-químicas com a eficiência de transfecção, alguns destes complexos foram caracterizados por espalhamento dinâmico de luz, em que complexos com protamina apresentaram tamanhos entre 116 e 363 nm e complexos com T-Rp3 apresentaram entre 135 e 307 nm e potenciais zeta entre +7,3 e +22,5 mV e +10,6 e +27,2 mV, respectivamente, dependendo das características das NPAu's.
- Imprenta:
- Data da defesa: 08.05.2017
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ABNT
PALMA, Matheus Mlot. Desenvolvimento de nanopartículas metal-proteína para a entrega de DNA em estudos de terapia e vacinação gênicas. 2017. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2017. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-25102017-075918/. Acesso em: 01 mar. 2026. -
APA
Palma, M. M. (2017). Desenvolvimento de nanopartículas metal-proteína para a entrega de DNA em estudos de terapia e vacinação gênicas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-25102017-075918/ -
NLM
Palma MM. Desenvolvimento de nanopartículas metal-proteína para a entrega de DNA em estudos de terapia e vacinação gênicas [Internet]. 2017 ;[citado 2026 mar. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-25102017-075918/ -
Vancouver
Palma MM. Desenvolvimento de nanopartículas metal-proteína para a entrega de DNA em estudos de terapia e vacinação gênicas [Internet]. 2017 ;[citado 2026 mar. 01 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-25102017-075918/
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