Geração de vetor lentiviral sintético para terapia genética ex vivo (2016)
- Authors:
- Autor USP: GOMES, FREDERICO GUILHERME FREITAS LOBãO RODRIGUES - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VCI
- Subjects: LENTIVIRUS; PROTEÍNAS; GENES; DNA RECOMBINANTE
- Keywords: Biologia sintética; Gene therapy; Lentivírus; Proteína terapêutica; Synthetic biology; Terapia gênica; Therapeutic protein
- Language: Português
- Abstract: A terapia gênica consiste em introduzir uma sequência de nucleotídeos, codificante ou não-codificante, que tenha a capacidade de interferir na progressão de uma doença por ativação, inativação ou modulação da expressão de um gene alvo. Uma das rotas de transferência gênica é a ex vivo. Essa rota consiste em realizar a modificação gênica ex vivo de um tipo celular do organismo afetado, seguida do transplante celular no indivíduo para a correção do fenótipo. Dentre os vários vetores virais utilizados para transferência gênica, o sistema lentiviral é considerado um dos mais eficazes, visto que é capaz de manter altos níveis de expressão a longo prazo. Além disso, dentre os vetores virais que se integram no genoma, esse é considerado o mais seguro, tendo apresentado apenas um caso com relatado de efeito colateral sem reação adversa. Uma nova tecnologia utilizada para padronizar sistemas biológicos é a biologia sintética. Essa tecnologia pode ser utilizada como ferramenta para produzir e/ou otimizar sistemas de expressão para produção de proteínas de interesse terapêutico. O objetivo desse trabalho é gerar um vetor lentiviral sintético, para terapia gênica ex vivo, para reposição enzimática. Foram geradas quatro linhagens celulares humanas com produção transiente das proteínas terapêuticas Prot_Ctr e Prot_Mut sob controle dos promotores CMV e HeF1a. Para padronização do ensaio de transfecção, foram geradas duas linhagens celulares humanas que expressão da proteína fluorescenteverde (GFP) sob controle dos mesmos promotores citados acima. Como controle negativo das linhagens produtoras da proteína terapêutica, foi gerada uma linhagem como vetor plasmidial vazio pLV_GTW_Mock. O nível de expressão do mRNA relativo às proteínas terapêuticas variou de 3.581,95 ± 1.322 a 10.377,18 ± 2.562 URE, não havendo diferenças significativas entre as linhagens produzidas (p > 0,05). O nível de produção da proteínas terapêuticas variou de 30,98 UI/mL a 241,1 UI/mL. A linhagem com maior produção dessa proteína foi a 293T/HeF1a_Prot_Mut, e essa diferença é significativa (p < 0,05). A partir da transfecção dos plasmídeos auxiliares e plasmídeo portador do cDNA que codifica a Prot-Mut na linhagem celular 293-T foi obtido o vetor lentiviral com título de 1,68x107 pLV/mL. Em conclusão, é possível gerar um vetor lentiviral funcional portador da Prot_Mut para utilização em terapia gênica ex vivo. Espera-se que o produto desse projeto de pesquisa gere uma patente. Para evitar a quebra de novidade, atividade inventiva e suficiência descritiva, requisitos mínimos de patenteabilidade, os resultados foram apresentados sem mencionar a doença e o gene em estudo
- Imprenta:
- Data da defesa: 16.09.2016
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ABNT
GOMES, Frederico Guilherme Freitas Lobão Rodrigues. Geração de vetor lentiviral sintético para terapia genética ex vivo. 2016. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-24012017-081720/. Acesso em: 29 jan. 2026. -
APA
Gomes, F. G. F. L. R. (2016). Geração de vetor lentiviral sintético para terapia genética ex vivo (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-24012017-081720/ -
NLM
Gomes FGFLR. Geração de vetor lentiviral sintético para terapia genética ex vivo [Internet]. 2016 ;[citado 2026 jan. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-24012017-081720/ -
Vancouver
Gomes FGFLR. Geração de vetor lentiviral sintético para terapia genética ex vivo [Internet]. 2016 ;[citado 2026 jan. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-24012017-081720/
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