Utilização do monitoramento de reações múltiplas para quantificação de produtos de interesse biotecnológico (2016)
- Authors:
- Autor USP: NASCIMENTO FILHO, EDSON GALDINO DO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: ESPECTROSCOPIA DE MASSA; FATOR VIII; HEMOFILIA
- Keywords: Monitoramento de reações múltiplas; Hemophilia A; Mass spectrometry; Multiple reaction monitoring; Recombinant factor VIII; Fator VIII recombinante
- Language: Português
- Abstract: A biotecnologia é definida como qualquer aplicação tecnológica que utilize sistemas biológicos, organismos vivos, ou seus derivados, para fabricar ou modificar produtos ou processos para alguma utilização específica (ORGANIZAÇÃO DAS NAÇÕES UNIDAS, 1992). Os produtos biotecnológicos devem atender certas especificações exigidas pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), Food and Drug Administration (FDA), European Medicine Agency (EMEA) e Wood Health Organization (WHO). Para isso, utilizam-se técnicas rotineiras aplicadas à pesquisa e análise de biomoléculas como Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE), Western blot, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e espectrometria de massas (MS). A abordagem do Monitoramento de Reações Múltiplas (MRM) é considerada uma interessante alternativa aos ensaios imunoenzimáticos para caracterização e quantificação total de proteínas terapêuticas, sejam elas recombinantes ou não (KIM e DOYLE, 2010). Esta abordagem é baseada nos fundamentos da proteômica quantitativa pela utilização da cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS) cuja plataforma apresenta alta especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade quantitativa em suas análises para detecção simultânea de várias regiões da estrutura proteica. Em vista disso, estabeleceu-se uma metodologia para quantificação do FVIII recombinante (FVIIIr) produzido pela linhagem celular humana Sk-Hep-1 ou do FVIII derivado do plasma (FVIIIdp), ambos utilizados no tratamento da Hemofilia A (HEMA). Para o estabelecimento da metodologia, toda uma estratégia de seleção e síntese química de peptídeos representativos das cadeias pesada e leve do FVIII humano foi empregada. Tais peptídeos obtidos foram utilizados como padrões das análises. Além disso, foi demonstrada a relação direta entre a quantificação total do FVIII com técnicas convencionais comoELISA, possibilitando a aplicação rotineira dessa abordagem para quantificação do FVIIIr e do FVIIIdp
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 23.11.2016
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ABNT
NASCIMENTO FILHO, Edson Galdino do. Utilização do monitoramento de reações múltiplas para quantificação de produtos de interesse biotecnológico. 2016. Mestrado Profissionalizante – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-30032017-090851/. Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Nascimento Filho, E. G. do. (2016). Utilização do monitoramento de reações múltiplas para quantificação de produtos de interesse biotecnológico (Mestrado Profissionalizante). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-30032017-090851/ -
NLM
Nascimento Filho EG do. Utilização do monitoramento de reações múltiplas para quantificação de produtos de interesse biotecnológico [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-30032017-090851/ -
Vancouver
Nascimento Filho EG do. Utilização do monitoramento de reações múltiplas para quantificação de produtos de interesse biotecnológico [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17156/tde-30032017-090851/
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