Caracterização biológica e molecular de cepas híbridas Leishmania (Viannia) guyanensis/Leishmania (Viannia) shawi shawi isoladas de pacientes com leishmaniose tegumentar oriundos da região amazônica, Santarém, PA-Brasil (2016)
- Authors:
- Autor USP: LIMA, ANA CAROLINA STOCCO DE - FM
- Unidade: FM
- Sigla do Departamento: MPT
- Subjects: LEISHMANIA; LEISHMANIOSE CUTÂNEA; ECOSSISTEMAS DE ÁREAS ÚMIDAS; PROTEÍNAS DO CHOQUE TÉRMICO; HIBRIDISMO; VARIAÇÃO GENÉTICA
- Keywords: Amazonian ecosystem; Cutaneous leishmaniasis; Genetic variation; Heat-shock proteins HSP70; Hybrids
- Language: Português
- Abstract: O conhecimento a respeito de mecanismos de reprodução e geração de diversidade genética de organismos do gênero Leishmania vem sendo alterado com o advento de novas tecnologias. Estudos de laboratório demonstraram ocorrência de reprodução sexuada experimentalmente em organismos do gênero Leishmania. Relatos na literatura mostram a ocorrência de híbridos no ambiente natural, associada a casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA). A partir da caracterização fenotípica realizada utilizando anticorpos monoclonais e eletroforese de isoenzimas em linhagens isoladas de pacientes com LTA na região Amazônica do Brasil, sete isolados (M15983, M15984, M15987, M15988, M19672, M19676 e M19697) apresentaram um padrão intermediário entre as espécies L. (V.) shawi shawi e L. (V.) guyanensis. O presente estudo visou realizar a confirmação da identidade híbrida desses parasitas através da clonagem dos isolados, seguida da análise do polimorfismo pela clivagem do produto da reação em cadeia da polimerase (PCR RFLP) tendo como alvo a enzima de choque térmico de 70 quilodaltons (hsp70). O hsp70 PCR RFLP também foi utilizado para análise comparativa da intensidade dos produtos de digestão, para estimar a ploidia dos híbridos e a proporção da herança dos alelos de hsp70. Foi realizada ainda, avaliação do comportamento biológico in vitro e experimental in vivo desses parasitas. A curva de crescimento foi realizada na 4° e 12° passagem após isolamento do parasita. Infecções experimentais de BALB/c foram realizadas paraavaliação da evolução da infecção causada pelo isolado híbrido selvagem M19672 e sua comparação com as cepas parentais L. (V.) guyanensis e L. (V.) s. shawi. Foi determinada a carga parasitaria em pele, linfonodo e baço dos animais infectados e análise histopatológica das lesões. Os resultados obtidos a partir da clonagem dos isolados demonstraram que se tratavam de populações homogêneas de parasitas. Três isolados apresentaram padrão heterozigoto de L. (V.) guyanensis/L. (V.) s. shawi e quatro isolados apresentaram padrão homozigoto, apresentando somente os alelos de L. (V.) s. shawi. O ensaio de clivagem de sequências polimórficas amplificadas (SNP-CAPS) mostrou que os homozigotos apresentaram o mesmo número de cópias de hsp70 de L. (V.) s. shawi, enquanto que nos heterozigotos os alelos de L. (V.) guyanensis são mais representativos. Os parasitas híbridos apresentaram uma maior plasticidade fenotípica no crescimento in vitro. A infeção de BALB/c pelos parasitas híbridos apresentou uma evolução rápida tendo seu maior pico entre 14 e 28 dias pós-infecção, com regressão posterior da lesão. Esse período foi acompanhado da maior carga parasitária na pele e linfonodo. A infecção causada pelas cepas parentais mostrou aumento progressivo da lesão a partir do 21° dia de infecção para L. (V.) guyanensis e 35° dia para L. (V.) s.shawi. As alterações histopatológicas da lesão causada pelo híbrido apresentaram um padrão intermediário entre as de L. (V.) s. shawi e L. (V.) guyanensis, guardando, no entanto, mais característicasdesta última. Nossos achados confirmam que as cepas analisadas são híbridas entre L. (V.) guyanensis e L. (V.) s. shawi da região do Baixo Amazonas, estado do Pará, área com alta ocorrência de casos de LTA na Brasil e grande diversidade de espécies do parasita, vetores e reservatórios
- Imprenta:
- Data da defesa: 03.11.2016
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ABNT
LIMA, Ana Carolina Stocco de. Caracterização biológica e molecular de cepas híbridas Leishmania (Viannia) guyanensis/Leishmania (Viannia) shawi shawi isoladas de pacientes com leishmaniose tegumentar oriundos da região amazônica, Santarém, PA-Brasil. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-18012017-151643/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Lima, A. C. S. de. (2016). Caracterização biológica e molecular de cepas híbridas Leishmania (Viannia) guyanensis/Leishmania (Viannia) shawi shawi isoladas de pacientes com leishmaniose tegumentar oriundos da região amazônica, Santarém, PA-Brasil (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-18012017-151643/ -
NLM
Lima ACS de. Caracterização biológica e molecular de cepas híbridas Leishmania (Viannia) guyanensis/Leishmania (Viannia) shawi shawi isoladas de pacientes com leishmaniose tegumentar oriundos da região amazônica, Santarém, PA-Brasil [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-18012017-151643/ -
Vancouver
Lima ACS de. Caracterização biológica e molecular de cepas híbridas Leishmania (Viannia) guyanensis/Leishmania (Viannia) shawi shawi isoladas de pacientes com leishmaniose tegumentar oriundos da região amazônica, Santarém, PA-Brasil [Internet]. 2016 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-18012017-151643/
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