Comparison of DNA extraction protocols to detect Mycobacterium bovis in bovine tissue by PCR (2016)
- Authors:
- Ikuta, Cássia Yumi - Universidade de São Paulo (USP)
- Oliveira, Daniella Carvalho Ribeiro - Universidade de São Paulo (USP)
- Souza, Gisele Oliveira de - Universidade de São Paulo (USP)
- Souza Filho, Antonio Francisco de - Universidade de São Paulo (USP)
- Grisi Filho, José Henrique de Hildebrand
- Heinemann, Marcos Bryan
- Ferreira Neto, Jose Soares
- USP affiliated authors: GRISI FILHO, JOSÉ HENRIQUE DE HILDEBRAND E - FMVZ ; HEINEMANN, MARCOS BRYAN - FMVZ ; FERREIRA NETO, JOSÉ SOARES - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- DOI: 10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709
- Subjects: MYCOBACTERIUM BOVIS; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO ANIMAL; TUBERCULOSE
- Language: Inglês
- Abstract: O atual comércio internacional de carne tem aumentado a pressão para haver um melhor e mais rápido diagnóstico de tuberculose bovina. O tradicional cultivo continua a ser o método padrão ouro para confirmar a infecção por Mycobacterium bovis, apesar de ser excessivamente demorado e necessitar de micobactérias viáveis. Métodos moleculares representam a superação de todos os defeitos dos métodos bacteriológicos com detecção e identificação mais rápidas. Entretanto, características das micobactérias, como uma complexa parede celular e a interação patógeno-hospedeiro, torna-os um desafio. Três protocolos de extração de DNA (A, B e C) foram testados em tecidos bovinos para verificar qual técnica é mais adequada para diagnóstico de rotina, avaliando sua especificidade e sensibilidade. Trinta lesões granulomatosas positivas no cultivo e 30 lesões granulomatosas negativas no cultivo foram utilizadas no experimento.A partir de cada amostra, três homogeneizados com diferentes diluições (10-1, 10-2 e 10-3) foram preparadas e submetidas à extração de DNA. A PCR para o gene alvo IS6110 foi realizada empregando-se dois volumes de DNA: um com 5 μL para todas as três diluições e outro com 2,5 μL da diluição 10-1. O Protocolo A foi capaz de detectar membros do complexo M. tuberculosis na maior parte das amostras. À medida que a diluição dos homogeneizados aumentou, a sensibilidade diminuiu. Embora o Protocolo A tenha apresentado a maior sensibilidade, seguido por C e B, este revelou a menor especificidade, que pode ser devido à insuficiência de organismos viáveis ou tempo de incubação no primo isolamento. Apesar de os métodos bacteriológicos clássicos ainda serem recomendados pela OIE, através da avaliação da sensibilidade dos protocolos de extração de DNA e dos procedimentos de PCR, concluímos que a melhor estratégia para a detecção de M. bovis é usar o Protocolo A em homogeneizados mais concentrados.
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- Título do periódico: Semina: Ciências Agrárias
- ISSN: 1676-546X
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 37, n. 5, supl. 2, p. 3709-3718, 2016
- Este periódico é de acesso aberto
- Este artigo é de acesso aberto
- URL de acesso aberto
- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc
-
ABNT
IKUTA, Cássia Yumi et al. Comparison of DNA extraction protocols to detect Mycobacterium bovis in bovine tissue by PCR. Semina: Ciências Agrárias, v. 37, n. 5, p. 3709-3718, 2016Tradução . . Disponível em: https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709. Acesso em: 18 set. 2024. -
APA
Ikuta, C. Y., Oliveira, D. C. R., Souza, G. O. de, Souza Filho, A. F. de, Grisi Filho, J. H. de H., Heinemann, M. B., & Ferreira Neto, J. S. (2016). Comparison of DNA extraction protocols to detect Mycobacterium bovis in bovine tissue by PCR. Semina: Ciências Agrárias, 37( 5), 3709-3718. doi:10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709 -
NLM
Ikuta CY, Oliveira DCR, Souza GO de, Souza Filho AF de, Grisi Filho JH de H, Heinemann MB, Ferreira Neto JS. Comparison of DNA extraction protocols to detect Mycobacterium bovis in bovine tissue by PCR [Internet]. Semina: Ciências Agrárias. 2016 ; 37( 5): 3709-3718.[citado 2024 set. 18 ] Available from: https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709 -
Vancouver
Ikuta CY, Oliveira DCR, Souza GO de, Souza Filho AF de, Grisi Filho JH de H, Heinemann MB, Ferreira Neto JS. Comparison of DNA extraction protocols to detect Mycobacterium bovis in bovine tissue by PCR [Internet]. Semina: Ciências Agrárias. 2016 ; 37( 5): 3709-3718.[citado 2024 set. 18 ] Available from: https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709 - High discrimination of Mycobacterium bovis isolates in Brazilian herds by spoligotyping
- Cryopreservation of Mycobacterium bovis isolates
- Bovine and human brucellosis in the Trans-Amazonian agricultural frontier, Uruará, Pará, Brazil
- Nontuberculous mycobacteria in milk from positive cows in the intradermal comparative cervical tuberculin test: implications for human tuberculosis infections
- Mycobacterium terrae complex species in cow raw milk
- Evolutionary analysis of Mycobacterium bovis genotypes across Africa suggests co-evolution with livestock and humans
- Productive profile of cattle-rearing farms in the state of Minas Gerais, Brazil, 2002
- Genetic profiles of Mycobacterium bovis from a cattle herd in southernmost Brazil
- Isolation and identification of Mycobacterium bovis in cattle slaughtered from an abattoir in Garanhuns, Pernambuco
- Isolation and identification of Mycobacterium bovis in milk from cows in northeastern Brazil
Informações sobre o DOI: 10.5433/1679-0359.2016v37n5Supl2p3709 (Fonte: oaDOI API)
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