Estudos proteômicos da transição epitélio-mesenquimal induzida por TGF-β e EGF em linhagens celulares de câncer de pâncreas (2016)
- Authors:
- Autor USP: CANCHAYA, GABRIELA NORMA SOLANO - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: CÉLULAS EPITELIAIS; NEOPLASIAS PANCREÁTICAS; FATORES DE CRESCIMENTO
- Keywords: Análise proteômica; Células epiteliais de câncer de pâncreas; SILAC; Transição epitelial-mesenquimal; Cancer epithelial cells; Epithelial-Mesenchymal transition; Growth factors; Proteomic analysis
- Language: Português
- Abstract: O câncer de pâncreas é considerado um dos adenocarcinomas mais agressivos, ocupando o quarto lugar de mortes devidas a câncer, isto é dado principalmente a seu desenvolvimento silencioso e a sua complexidade genética, tornando-o de difícil detecção. Consequentemente, o diagnóstico desta doença ocorre apenas em fase tardia, quando o tratamento é apenas para fins paliativos. As anomalias genéticas mais frequentes no câncer de pâncreas invasivo estão relacionadas à ativação por mutações do gene KRAS e à inativação dos genes supressores de tumor CDKN2A, TP53, SMAD4 e BRCA2. Além destas conhecidas vias de sinalização, fatores de crescimento como o TGF-β e EGF também apresentam papel fundamental na progressão e metástase do câncer de pâncreas. Interessantemente, TGF-β e EGF são também indutores do processo denominado transição epitelial-mesenquimal (EMT), onde células epiteliais normais, durante a embriogênese, ou células cancerosas durante a progressão tumoral e metástase, perdem seus contatos intracelulares e adquirem caráter migratório. Desta forma a EMT, induzida por altos níveis de TGF-β e/ou EGF, é considerada como um dos mecanismos de progressão tumoral em adenocarcinomas. No presente estudo, foram estudados os proteomas e o fosfoproteoma da EMT do PanCa. Assim, células de câncer de pâncreas PANC-1 foram induzidas à EMT em cultura com os fatores de crescimento TGF-β1 ou TGF-β2 e EGF, e após a indução, marcadores moleculares e propriedades funcionais de migração e invasão foram confirmados. Duas condições de indução da EMT foram estabelecidas, para as quais foram desenvolvidas as análises proteômicas quantitativas. A abordagem foi baseada em marcação isotópica de células em cultura (SILAC), em conjunto com fracionamento celular e de proteínas intactas, e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas para identificação de proteínas em larga escala. No total,aproximadamente 5.000 proteínas foram identificadas, e a maioria delas quantificadas com precisão nas duplicatas experimentais. Foram selecionadas 37 proteínas com expressão diferencial estatisticamente significativa nos experimentos proteômicos, as quais participam principalmente em processos de biogênese, adesão e apoptóticos. A análise de redes de interação revelou que as proteínas alteradas estavam principalmente localizadas em vias de sinalização que controlam processos de organização da matriz extracelular, splicing alternativo e regulação da apoptose. A análise do fosfoproteoma foi feita usando TGF-β1 como agente indutor da EMT nas células PANC-1, usando a estratégia ERLIC para o enriquecimento de fosfopeptídeos. No total, foram identificados 5.965 fosfopeptídeos não redundantes, correspondendo a um total de 2.250 fosfoproteínas analisadas, sendo quantificadas 2.053 ao menos em duas replicatas, e destas foram identificados 61 fosfopeptídeos regulados pertencentes a 55 fosfoproteínas, relacionados com processos de regulação do mRNA e vias de sinalização ligadas à adesão celular. Em conclusão, nosso estudo elucida potenciais novos alvos para inibição da EMT, controle da metástase, ou para auxiliar no diagnóstico da doença, quando devidamente validada
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2016
- Data da defesa: 07.07.2016
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ABNT
CANCHAYA, Gabriela Norma Solano. Estudos proteômicos da transição epitélio-mesenquimal induzida por TGF-β e EGF em linhagens celulares de câncer de pâncreas. 2016. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2016. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-05012017-095632/. Acesso em: 27 jan. 2026. -
APA
Canchaya, G. N. S. (2016). Estudos proteômicos da transição epitélio-mesenquimal induzida por TGF-β e EGF em linhagens celulares de câncer de pâncreas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-05012017-095632/ -
NLM
Canchaya GNS. Estudos proteômicos da transição epitélio-mesenquimal induzida por TGF-β e EGF em linhagens celulares de câncer de pâncreas [Internet]. 2016 ;[citado 2026 jan. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-05012017-095632/ -
Vancouver
Canchaya GNS. Estudos proteômicos da transição epitélio-mesenquimal induzida por TGF-β e EGF em linhagens celulares de câncer de pâncreas [Internet]. 2016 ;[citado 2026 jan. 27 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-05012017-095632/
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