Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni (2014)
- Authors:
- Autor USP: MATOS, VANESSA RAMOS - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Subjects: BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS; LEPTOSPIROSE; METALOPROTEINASES; PROTEINASES
- Keywords: Colagenases; Collagenases; Leptospira; Leptospiras; Leptospirose; Leptospirosis; Proteases; Proteases
- Language: Português
- Abstract: A leptospirose é uma zoonose, amplamente difundida pelo mundo, causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais de animais silvestres e domésticos. A transmissão ocorre, principalmente, pelo contato direto com água e solo contaminados com a urina de animais infectados que podem ser clinicamente assintomáticos. As leptospiras patogênicas invadem os tecidos do hospedeiro através da penetração da pele lesada ou mucosas da boca, narina e olhos. Logo após ultrapassar as superfícies de contato, as bactérias chegam rapidamente à corrente sanguínea e espalham-se para todos os órgãos causando lesões, principalmente, no fígado e rins onde produzem hemorragia e necrose tecidual. Após a entrada no hospedeiro, a progressão da infecção envolve a adesão das bactérias às células eucarióticas e às proteínas de matriz extracelular seguida pela invasão aos tecidos. Estudos recentes demonstraram que as leptospiras são capazes de se translocarem através das monocamadas celulares, o que poderia ser um mecanismo de evasão do sistema imune e também facilitaria a entrada e saída da corrente sanguínea para infectar órgãos-alvo. O mecanismo envolvido na invasão do patógeno através das barreiras extracelulares não está bem elucidado. Enzimas capazes de degradar proteínas da matriz extracelular poderiam contribuir com a motilidade e quimiotaxia das bactérias durante a invasão. Bactérias patogênicas sintetizam e secretam diferentes tipos de proteases, que atuamdegradando colágeno e glicoproteínas entre outras proteínas do hospedeiro. Recentemente, um estudo, utilizando gelatina e caseína como substratos e lisado bacteriano, mostrou haver uma variedade de proteases em Leptospira spp. Análises do genoma indicam a presença de vários genes que codificam prováveis proteases. A comprovação experimental da existência e a caracterização funcional destas proteínas poderão contribuir no entendimento da patogenia da leptospirose. Neste sentido, este trabalho teve como objetivos a clonagem, expressão e caracterização funcional de uma provável colagenase (ColA) de L.interrogans sorovar Copenhageni. As sequências codificantes do domínio de colagenase 1 (D1), do domínio de colagenase 2 (D2) e de ambos os domínios (Full) da ColA foram amplificadas por PCR a partir de DNA genômico de Leptospira e clonadas no vetor de expressão pAE. Os fragmentos D1, D2 e Full da ColA foram expressos em E. coli BL21 - SI e purificados a partir das frações insolúveis por cromatografia de afinidade a níquel. Os fragmentos recombinantes purificados foram utilizados na obtenção dos antissoros policlonais, e as atividades enzimáticas de cada um foram avaliadas. Os antissoros policlonais produzidos em coelho apresentaram elevados níveis de anticorpos detectados por ELISA. Experimentos de Western - blotting demonstraram a presença de proteína ColA em diferentes sorovares patogênicos de Leptospira spp. As proteínas Full e D2 apresentaram atividade catalítica sobre ocolágeno desnaturado e sobre peptídeo sintético e atividade hemorrágica em camundongos. Estes resultados indicam que ColA é provavelmente uma proteína de leptospira envolvidas na invasão de tecidos do hospedeiro
- Imprenta:
- Data da defesa: 24.04.2014
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ABNT
MATOS, Vanessa Ramos. Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni. 2014. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-22042015-170400/. Acesso em: 18 out. 2024. -
APA
Matos, V. R. (2014). Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-22042015-170400/ -
NLM
Matos VR. Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni [Internet]. 2014 ;[citado 2024 out. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-22042015-170400/ -
Vancouver
Matos VR. Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni [Internet]. 2014 ;[citado 2024 out. 18 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-22042015-170400/
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